血管平滑肌肌浆网RyR2对失血性休克血管“双相”反应性的调控及机制研究

失血性休克后血管反应性呈双相变化，但机制不清。分布于VSMC肌浆网不同区域的RyR2在血管张力调节中具有不同作用，推测FKBP12.6及sorcin通过调控VSMC肌浆网不同区域RyR2活性，促成休克血管双相反应性的形成，即：VSMC肌浆网近核区RyR2-FKBP12.6复合子形成减少诱导RyR2的激活，通过偶联CaM/CaMK II-MLCK依赖通路、促成休克早期血管高反应性的形成；而近质膜区RyR2-sorcin复合子形成减少诱导RyR2的激活，通过偶联PS2-BKCa通路、促成休克晚期血管低反应性的形成。本项目拟采用激光共聚焦、IP、基因转染、膜片钳、血管张力测定等技术，探讨肌浆网RyR2在休克血管双相反应性形成中的作用及其机制。旨在阐明肌浆网不同区域RyR2的激活与休克血管双相反应形成间的关系，从新的角度寻求休克血管反应性调节靶点，为从多靶点合理选用血管反应性恢复药物提供依据。

本实验室前期研究发现，失血性休克血管对血管活性物质呈“双相”反应，但机制不清。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）作为血管壁的主要细胞成分，其肌浆网钙库内钙的释放是调节血管舒-缩反应的关键环节之一，但肌浆网内钙释放是否参与休克后血管“双相”反应性的形成，尚无相关研究报道。本项目采用失血性休克（40 mmHg, 30 min/2h）、缺氧诱导血管平滑肌及VSMC“双相”反应性模型，通过转染RyR2-siRNA等技术证实：失血性休克早期及晚期均存成VSMC肌浆网由RyR2介导内钙释放的增强，且RyR2介导内钙释放的过度活化促成了失血性休克大鼠血管“双相”反应性的形成（该部分内容已发表于Acta Pharmacol Sin 2014;35(11): 1375-84）。此外，在失血性休克早期，FKBP12.6从RyR2解离并由肌浆网膜向胞浆转位，导致休克早期由RyR2介导肌浆网内钙释放的增强及CaM从RyR2解离，胞浆游离Ca2+及CaM升高通过偶联CaMKⅡ\MLC20磷酸化通路，促成失血性休克早期血管高反应性的形成；而在失血性休克晚期，sorcin从RyR2解离并由肌浆网膜向胞浆转位，导致休克晚期由RyR2介导肌浆网内钙释放的增强；胞浆游离Ca2+及sorcin可促进PS2-BKCa通道β亚基蛋白分子间的相互作用，从而通过偶联BKCa通道促成休克晚期血管低反应性的形成。.本项目明确了在失血性休克不同时相，血管平滑肌肌浆网RyR2存在不同激活方式；其中在休克早期由于FKBP12.6与肌浆网RyR2的解离导致RyR2介导内钙释放显著增强，通过偶联CaM/CaMKⅡ/ MLC20磷酸化依赖信号通路，促成休克早期血管对去甲肾上腺素（NE）的高反应形成；而在休克晚期由于sorcin与肌浆网RyR2的解离导致RyR2介导内钙释放显著增强，通过偶联PS2/BKCa依赖信号通路，促成休克晚期血管对NE的低反应形成。通过对本项目的研究，从新的角度解释了失血性休克后外周阻力血管对血管活性物质“双相”反应性形成的物质基础，并为寻求休克血管反应性恢复剂提供新思路。.通过对本项目的研究，已发表论著3篇，其中SCI（IF：2.798）论著1篇，目前尚有一篇SCI论著正在撰写中；此外，通过对本项目的前期研究结果，还获得国家自然科学基金资助面上项目1项