人3型腺病毒-肠道病毒71型主要中和抗原表位嵌合体构建及应用基础研究

本课题拟在项目组前期已成功地研究了人3型腺病毒感染性克隆、复制缺陷型人3型腺病毒载体系统、3-7型主要中和抗原表位嵌合型重组病毒等工作的基础上，通过生物信息学、基因工程、病毒学、免疫学等技术方法，对肠道病毒71型的主要中和性抗原表位和人3型腺病毒的六邻体上的抗原（中和性/非中和性）表位进行较为深入的研究。通过基因改造，在前期研究已阐明可置换的3型腺病毒六邻体抗原表位上以置换方式插入肠道病毒71型上的关键中和性抗原表位、获得其主要中和性抗原表位展示于腺病毒表面的嵌合型重组病毒，通过动物免疫鉴定插入外源抗原表位的免疫原性，通过中和试验评价嵌合型肠道病毒71型-腺病毒重组体作为肠道病毒71型疫苗和3型腺病毒作为抗原表位展示平台应用于疫苗研发的可能性。为人3型腺病毒抗原表位展示系统进行多价疫苗的研究和应用奠定基础，进一步证实"病毒型特异性主要中和抗原表位仅限于极少数病毒表面抗原表位"的假设。

本面上项目31070150，执行时间2011年1月至2013年12月。执行过程中，课题组团队稳定，完成了各项任务：① 对人3型腺病毒（HAdV3）主要高变区表位特性和可置换性进行了系统研究，阐明了高变区表位可被外源抗原表位置换、并展示于病毒外壳表面，且不影响母本病毒特性，鉴定出HAdV3和 HAdV7的主要中和抗原表位分别高变区HVR1和HVR5（论文发表于JV，2012.8,SCI IF5.341）；② 完成HAdV3特异性中和单抗制备及鉴定（论文发表于Virus Res,2013.8,SCI IF2.745）；③ 阐明HVR1区可接受外源表位的容量为17aa、及外源多肽插入并展示后的抗原特性研究（论文发表于Arch Virol，2012.6，SCI IF2.209）；④ 系统分析了肠道71型病毒（EV71）的主要中和表位，将15aa的EV71中和表位SP70以置换嵌入HAdV3六邻体HVR1、HVR2、HVR7区，获得3株SP70表位展示于HAdV3表面的重组子，通过体外细胞中和实验及动物保护实验证实该重组子具备作为EV71疫苗株潜力（论文发表于PLoS One,2012.7，SCI IF4.35）；⑤ 成功构建了同时展示EV71病毒SP70和SP55双中和表位的HAdV3重组子，并完成体内外中和特性研究（论文已标注及投稿）。这些研究结果提示EV71中和表位嵌合型腺病毒具备手足口病（HFMD）新型疫苗应用的潜力。通过本课题的研究进一步证明了“人3型腺病毒表位展示载体平台”的科学性和可应用性。在课题研究过程中，University of Eastern Finland 病毒所、Dr. Malthews lab、University of Alabama、重庆医科大学儿童医院等多家国内外研究小组索取我们的HAdV3载体系统及寻求合作，显示了本课题成果可能作为表位展示和抗原呈递的载体应用于其它病原体和癌症疫苗研发应用的潜力。本课题已共发表SCI论文4篇、中文核心期刊1篇、会议论文1篇、译著1部；申请发明专利2项；培养博后2人、硕士生7人（3人已毕业并均获优秀毕业生）、2名中青年带头人。经费使用规范，圆满完成了立项任务和目标。