藤黄酸靶向酪氨酸激酶克服格列卫耐药的机制研究

The refractory mutation Bcr-Abl and the T315I and of c-KIT D816V of protein tyrosine kinase, is currently considered to be the main reason that causes Gleevec-resistance for chronic myelogenous leukemia and gastrointestinal stromal tumor targeted therapies. Our preliminary studies confirmed that Chinese herbal medicine active ingredients Gambogic acid can effectively reduce Gleevec resistance point mutations in the T315I Bcr-Abl protein expression, downregulate the c-KIT ligand KITLG level, significantly inhibite the proliferation of Gleevec-resistant leukemia cell lines. On the basis of gambogic acid pharmacodynamics, the aim of this project is to explore the molecular mechanism of Gambogic acid downregulating Gleevec resistance point mutations of Bcr-Abl, c-KIT protein expression and kinase activity, to state the relationship between the Gambogic acid inhibition of tyrosine kinase and confrontation Gleevec-resistance; to confirme the role of the compounds overcoming Gleevec-resistance in the primary cells of whole animal and tolerability patients; to further explore the synergy role of overcoming Gleevec-resistance with Gambogic acid and conventional chemotherapy drugs. The expected results of this subject is to provide a new strategy and new ideas for Gambogic acid targeting tyrosine kinases to overcome chronic myeloid leukemia and gastrointestinal stromal tumors Gleevec-resistance, to provide the experimental data for the compounds solvinge grid Gleevec-resistance clinical translational research.

蛋白酪氨酸激酶Bcr-Abl T315I及c-KIT D816V顽固性点突变，目前被认为是引发慢性粒细胞性白血病及胃肠间质瘤对靶向治疗药物格列卫耐受的主要原因。申请人前期研究证实我国中草药活性成分藤黄酸能有效降低格列卫抵抗性点突变T315I Bcr-Abl蛋白表达，下调c-KIT配体KITLG水平，显著抑制格列卫耐药白血病细胞株的增殖。本项目在明确藤黄酸药效学功能的基础上探讨藤黄酸下调格列卫抵抗性点突变Bcr-Abl、c-KIT蛋白表达及激酶活性的分子学机理，阐明藤黄酸抑制酪氨酸激酶与对抗格列卫耐受的关系；在整体动物和耐受病人原代细胞中证实该化合物克服格列卫耐受的作用；进一步探讨藤黄酸与传统化疗药物的协同抗格列卫耐药作用。本课题的预期结果将为藤黄酸靶向酪氨酸激酶克服慢性粒细胞性白血病、胃肠间质瘤产生的格列卫耐受提供新的策略与新的思路，也为该化合物解决格列卫耐药的临床转化研究提供实验数据。

藤黄酸是我国中医药资源中抗肿瘤作用的典型代表，SFDA已经批准用于肿瘤的临床治疗，其毒副作用非常小，几乎不产生骨髓造血抑制，目前已经进入三期临床。蛋白酪氨酸激酶Bcr-Abl T315I及c-KIT D816V顽固性点突变，目前被认为是引发慢性粒细胞性白血病及胃肠间质瘤对靶向治疗药物格列卫耐受的主要原因。我们在前期的研究中发现，藤黄酸是一个典型的蛋白酶体抑制剂，能有效降低格列卫抵抗性点突变T315I Bcr-Abl蛋白表达，下调c-KIT配体KITLG水平，显著抑制格列卫耐药白血病细胞株的增殖。本课题通过体内外药效学功能分析与检测深入探讨了藤黄酸克服慢性粒细胞性白血病及胃肠间质瘤格列卫耐受的分子学机制，为藤黄酸靶向酪氨酸激酶克服慢性粒细胞性白血病、胃肠间质瘤产生的格列卫耐受提供新的策略与新的思路，也为该化合物解决格列卫耐药的临床转化研究提供实验数据。同时进行了藤黄酸靶向治疗消化道肿瘤的研究，通过体内外试验探讨了藤黄酸对结直肠癌的抑制作用，为藤黄酸靶向治疗结直肠癌提供重要实验依据，为藤黄酸的临床个体化抗肿瘤作用的应用奠定基础。项目资助发表相关论文18篇，其中在SCI收录杂志发表5篇。项目组成员相关研究成果获得2013年广州市科学技术奖一等奖及二等奖各一项，2015年广东省科学技术奖三等奖一项。博士后出站1名，培养毕业博士生1名，硕士生8名，其中两人获得国家奖学金。组织了四次国内学术会议。项目投入经费65万元，支出65万元，各项支出基本与预算相符。