IKKα以非依赖NF-κB方式调控CyclinD1影响子宫内膜容受性的机制研究

Embryo implantation is a complex biological process, which is important for species production. Recent studies found that IKKα play a vital role in female reproduction. Meanwhile, our data revealed that IKKα was involved in the formation of endometrial receptivity. However, the underlying mechanism is still unknown. Present study intends to establish a in vitro decidual model and investigate the expression pattern of IKKα in embryo implantation using molecular biological technical. Then, siRNA were used to downregulate IKKα and the expression of cyclin D1 during in vitro decidualization process were recorded. This program may further improve our knowledge of embryo implantation theory and provide a potential regulation target for reproductive intervention.

成功的妊娠需要有活性的胚胎和具有容受性的子宫内膜。近年来研究发现，着床窗期细胞周期蛋白Cyclin D1的表达下调对子宫内膜蜕膜化的成功必不可少，但上游机制尚未完全明确。我们的工作基础发现IKKα被沉默后，人类子宫内膜基质细胞体外蜕膜化障碍，而此时cyclin D1的表达明显上升；且小鼠着床窗期子宫内膜IKKα被腺抑制时，小鼠胚胎着床数目明显减少。我们推测IKKα通过调节cyclin D1影响子宫内膜基质细胞蜕膜化过程从而影响胚胎着床。本课题拟通过构建体内外模型，利用腺病毒载体及分子生物学技术验证上述推论并探寻IKKα调控cyclin D1的机制，进一步完善和理解胚胎着床理论，为有效干预胚胎着床奠定基础。

胚胎着床是指胚泡进入子宫腔后与子宫内膜黏附，是胚胎和子宫内膜之间的相互接触，对话并最终互相适应的动态过程。子宫内膜上皮细胞是其中的重要一员。MiR-23a对多种细胞的增殖，分化等有较为重要的影响。Listing H等发现miR-23a调控Wnt-β-catenin信号通路, 并且在GEO数据库（GSE35995）中发现miR-23a在猪妊娠初期间表达量逐渐增加，并且通过Target Scan预测发现miR-23a靶向调控CUL3，且在物种间保守性较高。.Wnt-β-catenin信号通路已被证实参与到胚胎与子宫内膜的黏附过程中，并且受到泛素化的调控。而有研究者发现KLHL12-CUL-3泛素连接酶通过Dosha泛素化负向调控Wnt-β-catenin通路。Yuan J等发现CUL-4通过抑制Wnt-β-catenin抑制剂作用从而促进Wnt-β-catenin信号通路。那么，CUL-3能否通过调控Wnt-β-catenin信号通路关键性分子（如Wnt1/4）的泛素化从而影响胚胎着床?.本课题通过在小鼠子宫内膜上皮细胞检测其miR-23a与CUL3的表达，过表达或抑制miR-23a及CUL-3表达后，检测Ishikawa中CUL3的表达，Wnt-β-catenin相关信号通路蛋白表达，以及白血病抑制因子，整合素等内膜容受相关标记分子的表达, 阐明miR-23a与CUL3在子宫内膜上皮细胞的表达规律及其对胚胎着床的影响。通过双荧光素酶实验、泛素化检测及体外2D模型明确miR-23调节子宫内膜上皮细胞中CUL3影响胚胎着床的机制。.实验结果显示，鼠胚胎着床过程中，miR-23a表达升高而CUL3 mRNA和蛋白表达下调；且雌激素和孕酮刺激联合刺激可显著上调miR-23a表达，而明显降低CUL3表达。miR-23a不同表达水平对Wnt1 mRNA和蛋白表达均无明显影响，miR-23a对β-catenin mRNA水平也无显著影响，但过表达miR-23a明显上调β-catenin蛋白表达，而抑制miR-23a则显著降低β-catenin蛋白水平。双荧光素酶实验、泛素化检测及体外2D模型结果证实了miR-23通过子宫内膜上皮细胞中CUL3泛素化调节Wnt-β-catenin信号通路影响胚胎着床。本课题进一步完善了胚胎着床理论，为有效干预胚胎着床奠定基础。