补肾活血汤影响子宫内膜异位症内膜容受性的机制研究

Bushen Huoxue Tang (BSHXT) is one of our traditional prescription for kidney deficiency and blood stasis type of endometriosis(EMT)-associated functional infertility, which can also improve the endometrial receptivity, but the mechanism is still unclear. HOXA10 is the key target of regulation of endometrial receptivity. miR-135a can specifically inhibit HOXA10 expression in EMT. Our previous study demonstrated that BSHXT can significantly reduce miR-135a expression and increase HOXA10 expression in endometrium in EMT infertility patients. We speculate that BSHXT could improve the endometrial receptivity by inhibiting miR-135a expression and enhancing HOXA10 expression. This study will elucidate the mechanism of effect of BSHXT on improving endometrial receptivity in cellular and molecular levels by using EMT rat model, the endometrial stromal cells, RNAi and gene overexpression techniques. This will provide scientific and theoretical basis for treatment of EMT dysfunction infertility by using BSHXT.

补肾活血汤（BSHXT）为我院治疗肾虚血瘀型子宫内膜异位症（EMT）功能性不孕的经验方，临床改善子宫内膜容受性疗效满意，但该方具体作用途径与机制尚不清楚。HOXA10是子宫内膜容受性建立的关键靶点。miR-135a能够特异性调控HOXA10，在EMT患者子宫内膜中高表达抑制了HOXA10的表达。我们前期研究发现BSHXT可以显著降低EMT不孕患者子宫内膜中miR-135a表达，增加HOXA10的表达，推测BSHXT可能通过抑制miR-135a的表达，进而解除对HOXA10基因启动子区的抑制，增强HOXA10的表达，从而改善子宫内膜容受性。本项目拟在既往研究的基础上，应用EMT大鼠模型、原代子宫内膜间质细胞模型，结合基因RNAi和过表达技术，从整体、细胞和分子水平深入探讨BSHXT改善EMT子宫内膜容受性的效应机制，为阐明中药复方BSHXT治疗EMT功能性不孕提供新的科学依据和理论基础。

补肾活血汤为我院治疗肾虚血瘀型子宫内膜异位症功能性不孕的经验方，临床改善子宫内膜容受性疗效满意，但该方具体作用途径与机制尚不清楚。HOXA10是子宫内膜容受性建立的关键靶点。miR-135a能够特异性调控HOXA10，其在子宫内膜异位症患者内膜中高表达抑制了HOXA10的表达。我们前期研究发现补肾活血汤可以显著降低子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜中miR-135a表达，增加HOXA10的表达。推测补肾活血汤可能通过抑制miR-135a的表达，进而解除对HOXA10基因启动子区的抑制，增强HOXA10的表达，从而改善子宫内膜容受性。为了验证该科学假说，我们分别从整体动物实验和离体细胞实验深入探究补肾活血汤改善子宫内膜异位症内膜容受性的效应机制。研究结果显示，补肾活血汤能够显著增加子宫内膜异位症模型小鼠胚胎数及妊娠率。进一步研究发现，补肾活血汤干预后模型小鼠子宫内膜HOXA10蛋白、mRNA表达量明显增加，与此同时，模型小鼠子宫内膜中整合素avβ3蛋白、mRNA亦有升高，而miR-135a表达量则显著降低，通过Pearson相关性分析，小鼠子宫内膜中miR-135a表达与HOXA10表达呈负相关。为了明确补肾活血汤的作用机制，我们进而对原代子宫内膜间质细胞（ESCs）转染miR-135a mimics（运用化学合成的方法合成，能增强内源性miR-135a的功能）、HOXA10 siRNA。miR-135a mimics可以抑制HOXA10及整合素avβ3的表达，但HOXA10 siRNA对miR-135a的表达无显著影响，仅抑制了整合素avβ3的表达，说明miR-135a抑制了HOXA10基因启动子区，降低了HOXA10及其下游整合素avβ3的表达。而补肾活血汤含药血清干预后，抑制了miR-135a的表达，增强了HOXA10及整合素avβ3的表达，由此推定，补肾活血汤通过抑制miR-135a的表达，进而解除对HOXA10基因启动子区的抑制，增强HOXA10的表达，进一步提高整合素avβ3的表达，从而改善子宫内膜异位症模型小鼠内膜容受性，提高妊娠率。该理论基础的明确为阐明补肾活血汤改善子宫内膜异位症不孕患者内膜容受性提供关键理论基础，同时为基于调节HOXA10相关的子宫内膜容受性因子为靶点的提高子宫内膜异位症内膜容受性药物研发提供了新的策略。