辛芩片抑制豚鼠变应性鼻炎肥大细胞脱颗粒的机制研究

The incidence of Allergic rhinitis (AR) increased globally in recent years. Traditional Chinese medicine is effective in the treatment of AR , but the mechanism has not been understood. It has been reported that inflammatory meditors such as histamine and leukotriene released by degranulated mast cells played an elemented role in AR, and JAK-STAT signal pathway was important in the regulation of mast cell degranulation. Our preliminary study suggested that Tranditional Chinese medicine Xinqin Tablets could significantly reduce histamine in the nasal mucosa of guinea pig AR model. This study is intended to investigate the effect of Xinqin Tablets to mast cell degranulation by immunohistochemistry and ELISA in human mast cells (HMC-1) and the guinea pigs of AR model, and further explore the influence of Xinqin Tablets to the expression of JAK, STAT and SOCS3 in JAK-STAT signal pathway by RT-PCR and Western blot. Our study aims to reveal whether Xinqin Tablets inhibit mast cell degranulation by adjusting the JAK-STAT signal pathway, and elucidate the molecular mechanisms of Xinqin Tablets on AR, and provide evidence for the treatment of AR with tranditional medicine.

变应性鼻炎（Allergic rhinitis, AR）全球发病率逐年上升，中药治疗AR临床疗效好，但其治疗机制尚未阐明。国内外文献表明，肥大细胞脱颗粒释放组胺、白三烯等炎性介质是引起AR的关键因素，而JAK-STAT 信号通路在调控肥大细胞脱颗粒中具有重要作用。课题组前期研究结果提示：中药辛芩片可显著降低豚鼠AR模型鼻粘膜中组胺的含量。本课题拟利用人肥大细胞（HMC-1）和豚鼠AR模型，通过免疫组化、ELISA等方法观测辛芩片对肥大细胞脱颗粒影响，并进一步采用RT-PCR、Western blot等方法检测辛芩片对JAK-STAT信号通路中JAK、STAT和SOCS3等蛋白表达水平，探讨中药辛芩片是否通过调节JAK-STAT信号通路抑制肥大细胞脱颗粒，初步阐明中药辛芩片治疗AR的分子机制,为中药治疗AR提供依据。

变应性鼻炎（Allergic rhinitis，AR）全球发病率逐年上升，中药治疗AR临床疗效好，但其治疗机制尚未阐明。国内外文献表明，肥大细胞脱颗粒释放组胺、白三烯等炎性介质是引起AR的关键因素，而JAK/STAT信号通路在调控肥大细胞脱颗粒中具有重要作用。课题组主要利用人肥大细胞HMC-1和豚鼠AR模型分别从体外细胞及体内动物实验两方面，通过免疫组化、ELISA等方法观察辛芩片对肥大细胞脱颗粒的影响，并进一步采用蛋白免疫印迹法检测辛芩片对JAK2/STAT5信号通路中JAK2、STAST5和SOCS3蛋白表达水平的影响。研究结果显示，在 A23187及PMA联合刺激构建的HMC-1肥大细胞AR细胞模型中，辛芩可抑制HMC-1肥大细胞脱颗粒并呈浓度依赖的抑制HMC-1组胺及白三烯D4的释放，同时可显著抑制TNF-α及IL-6的表达，表明辛芩抑制肥大细胞HMC-1脱颗粒并显著减少炎症介质的释放。机制研究发现，辛芩抑制JAK2/STAT5信号通路中关键蛋白JAK2及STAST5磷酸化的活化，并增强反调控因子SOCS3的表达，表明辛芩抑制HMC-1肥大细胞AR模型中JAK2/STAT5信号通路。采用TDI滴鼻法构建的AR豚鼠动物模型中，通过鼻炎症状叠加法计分显示，辛芩能显著减轻豚鼠鼻炎症状，并且减少豚鼠鼻黏膜中嗜酸性粒细胞浸润。辛芩可显著抑制AR鼻炎豚鼠模型的鼻黏膜肥大细胞脱颗粒。采用ELISA检测血清因子的含量，辛芩显著减少lgE、组胺、白三烯D4含量，表明辛芩抑制lgE、组胺、白三烯D4的释放，同时可显著抑制血清TNF-α及IL-6的表达。进一步机制研究发现，辛芩抑制豚鼠鼻黏膜JAK2/STAT5 信号通路中关键蛋白JAK2及STAST5磷酸化的活化，并增强反调控因子SOCS3的表达，表明辛芩抑制AR豚鼠模型中JAK2/STAT5信号通路。综上，中药辛芩片通过抑制JAK2/STAT5信号通路抑制肥大细胞脱颗粒，阐明辛芩片治疗AR的分子机制。本研究揭示了中药辛芩片对AR的治疗作用及作用分子机制为中药治疗AR提供理论依据，为寻找AR的治疗靶点提供启发。