无蹼壁虎两大线粒体支系分类地位的界定

无蹼壁虎是中国的特有物种。我们在前面的研究中，发现秦岭隆起造成的扩散和气候隔离促使无蹼壁虎分为A和B两个线粒体Cyt b支系；两个支系在接触区同域分布；而支系间的遗传分歧达到了14%。文献报道也表明无蹼壁虎种群间存在一些形态差异。但已有的DNA分子和形态学证据还不能确定这2个支系的分类学地位。本项目以无蹼壁虎两大线粒体支系的分类地位为主要科学问题，进行整合分类学研究：形态学特征的比较；建立无蹼壁虎两支系雄性抑制性差减杂交文库，筛选和鉴定精液蛋白基因，获得可能的种化基因；基于种化基因和其他基因的序列构建系统发生树；阐明两大支系间的渐渗杂交格局；界定物种边界。项目的研究成果对于揭示种群歧异、生态适应、物种形成、二次接触及渐渗杂交过程具有重要意义，也可为壁虎类物种边界的界定提供科学依据。

对采自A、B两大线粒体支系7个样地的无蹼壁虎样本进行了形态测量和统计分析。双因子方差分析表明A、B支系的样本在尾长、第四指（趾）长和头宽上存在显著差异。构建了无蹼壁虎雄性成体和亚成体性腺的抑制性消减cDNA文库，从正、反向文库中分别测得1364和905条有效序列，完成了EST序列的同源性比对和功能性分析。获得9个基因的cDNA全长序列，通过支系间cDNA序列的比较，寻找快速进化区域，用于种群扩增和测序。无蹼壁虎蛋白iTRAQ分析结果显示，雌、雄成体的性腺组织中差异蛋白数量为137个，其中74个为上调蛋白，63个为下调蛋白。测定了无蹼壁虎、粗疣壁虎和中国壁虎的COI基因部分片段，结合其他已知序列，对我国9种壁虎的DNA条码序列进行比较分析。结果显示该条码在壁虎属物种中有很好的识别能力，可以用于物种鉴定。测定了壁虎类4物种的线粒体基因组全序列，重建系统发生树，探讨了壁虎类蜥蜴之间的系统发生关系，结果并不支持根据核基因数据得到的叶趾虎科Phyllodactylidae与壁虎科Gekkonidae的姐妹群关系。利用RT-PCR技术从无蹼壁虎中获得了6个鸟类Z染色体连锁基因的cDNA片段序列，并进行了同源性比较和选择压力分析。