针灸预处理诱导热休克蛋白表达打开心肌缺血预适应“第二保护窗”作用机制的研究

急性心肌梗死，即因持久而严重的心肌缺血而致部分心肌急性坏死，其死亡率和致残率相当高，已成为全世界范围的主要死因之一，防治本类疾病具有非常重要的意义。本研究是在前期研究基础上，建立兔心肌缺血再灌注（I/R） 损伤模型、心肌缺血预适应(IP)模型和针灸缺血预适应模型，以IP 心脏保护作用为阳性对照，采用免疫组化、放免、高效液相色谱法、原位杂交、TUNEL及形态学检测等多种技术手段，通过对心电的监测、内源性活性物质、PKC、热休克蛋白（HSPs）等的检测，评价连续7天的针灸预处理是否通过诱导HSPs 的表达对心肌I/R损伤产生延迟相保护作用，其作用强度是否能够达到IP心脏保护作用的水平。且通过观察不同时相比较电针与艾灸预处理对I/R 的效应及诱导HSPs 的差异。从生物化学角度探讨针灸预处理打开心肌缺血预适应"第二保护窗"的作用机制，为针灸"治未病"及"胸胁内关谋"理论在临床的应用提供实验依据。

本研究是在前期研究基础上，建立兔心肌缺血再灌注（I/R） 损伤模型，以心肌缺血预适应（IP）保护作用为阳性对照，采用免疫组化、放免、高效液相色谱法、原位杂交、TUNEL 及形态学检测等多种技术手段，通过对心电的监测、内源性活性物质、PKC、热休克蛋白（HSPs）等的检测，探讨针灸预处理启动内源性保护物质与缺血再灌注损伤延迟保护作用的关系；比较电针、艾灸两种预处理手段对HSPs 家族的诱导表达是否一致。研究发现：1.电针预处理与艾灸预处理对MIRI兔心肌组织具有延迟保护效应，可以减轻兔心肌组织形态学破坏。2.电针预处理与艾灸预处理可以增加MIRI兔血清中内源性保护物质NO、NOS及腺苷的释放，诱导心肌保护蛋白HSPs的表达。3. 艾灸预处理增强热休克蛋白表达的能力优于电针预处理，表明热休克蛋白的表达可能对热刺激更为敏感。4.针灸预处理在不同时相对血清CK、血浆ET、心肌PKC、HSP70的作用效果有所不同，在48h相电针和艾灸这两种干预手段均显示出良好的调控作用。5.电针预处理可在延迟时相进一步激活因缺血再灌注损伤而升高的PKC活性，并能有效诱导HSP70mRNA的表达，提示激活“PKC磷酸化—HSP70”是电针启动延迟相保护的关键步骤。6.在HSP各家族中，HSP70对电针预处理的应答具有特异性。7.电针预处理可在延迟时相有效抑制缺血再灌注损伤条件下的心肌细胞凋亡，并能下调死亡受体通路Fas/FasL系统的表达，提示下调“Fas/FasL—细胞凋亡”是电针实现延迟相保护的重要途径。为针灸“治未病”及“胸胁内关谋”理论在临床的应用提供了实验依据。本项目已在国内外学术期刊发表论文9篇，SCI收录1篇，CSCD收录2篇，培养博士、硕士研究生3名，2010年获国际针灸经络研究学术会议优秀论文奖。