DR5功能性单抗逆转卵巢癌顺铂耐药的机制研究

卵巢癌的铂类耐药是影响其化疗效果的不利因素。DR5是TNF相关的凋亡诱导配体（TRAIL）的其中一个受体，它与TRAIL结合能诱导肿瘤细胞凋亡，而对人体正常细胞无毒性。本课题应用DR5功能性单抗于耐顺铂卵巢癌细胞凋亡的研究，采用人源化的DR5功能性单抗，利用其不同于顺铂的细胞凋亡信号传导途径的机理，探讨DR5单抗能否促进耐药细胞发生凋亡并逆转卵巢癌细胞顺铂耐药？DR5功能性单抗与顺铂联合是否能增强功能性单抗的促凋亡效果？两者联合对耐药细胞杀伤有无协同作用？以及功能性DR5单抗与顺铂联合对细胞凋亡信号传导因子caspase表达有何影响？均是本课题拟研究的关键问题，以期寻找逆转卵巢癌细胞对顺铂耐药的方法。该课题探索可能对顺铂耐药卵巢癌的生物治疗提出新的思路。

目的:DR5单克隆抗体（D-6）单独或联合顺铂对卵巢癌A2780细胞、耐顺铂卵巢癌C30细胞及C30裸鼠移植瘤的肿瘤杀伤作用及促凋亡作用研究。方法:MTT法和WST-1法分别检测不同浓度D-6及顺铂联合用药对A2780细胞和C30细胞的生长抑制作用；倒置显微镜及电镜分别观察A2780细胞和C30细胞在对照组、顺铂组、D-6、联合组处理后的形态改变；Western Blot分别检测在A2780细胞和C30细胞中凋亡相关蛋白前体pro-caspase3,8,9的表达情况；流式细胞仪检测DR5单克隆抗体及顺铂联合用药对A2780细胞凋亡的影响。构建裸鼠耐顺铂卵巢癌C30移植瘤模型，检测不同处理组中实体肿瘤生长抑制效果；检测C30移植瘤组织中不同组pro-caspase3,8,9的表达情况。结果:随着D-6浓度的升高，卵巢癌细胞A2780、耐顺铂卵巢癌细胞C30的生长抑制率也逐渐升高，且D-6联合顺铂用药对A2780和C30细胞的生长抑制率明显高于单用D-6，表明D-6能逆转C30细胞对顺铂的耐药。A2780细胞、C30细胞的pro-caspase3,8,9表达均下调，且A2780细胞在联合组中pro-caspase3,8,9表达下调更明显。A2780细胞和C30细胞均观察到在D-6组和顺铂组中存在明显的细胞凋亡形态改变，且这种凋亡形态改变在联合组中更加明显。流式细胞仪检测发现D-6组、顺铂组、联合组细胞凋亡率均高于对照组，其中联合组细胞凋亡率最高，明显高于D-6组和顺铂组。在耐顺铂卵巢癌C30移植瘤模型中， D-6单用或联合顺铂用药可以明显抑制肿瘤生长。D-6联合顺铂用药后移植瘤组织中的pro-caspase3,8,9表达明显下调。结论：D-6对A2780和C30细胞的生长有明显抑制作用，且与顺铂联合作用后可增强其抗肿瘤作用，能够克服耐顺铂C30细胞对顺铂的耐药，通过caspase依赖凋亡路径激活肿瘤细胞发生凋亡。DR5单克隆抗体（D-6）可能成为一种有潜力的新型抗肿瘤药物。