基于p38MAPK通路探讨电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及效应机制

Based on myocardial ischemia reperfusion injury and p38MAPK signal pathway is closely related, neiguan acupoint has been the classic and first point in the treatment of heart disease.On the basis of previous research work,myocardial ischemia reperfusion injury in rats for the study,the electroacupuncture pretreatment and ischemic preconditioning,drugs (norepinephrine) pretreatment will be applied to observe the protective effect of electroacupuncture pretreatment on myocardial ischemia reperfusion injury,and to explore the advantages of electroacupuncture pretreatment.We will use p38MAPK signaling pathway inhibitors to block signal pathway,the rat anti free radical enzymes,inflammatory cytokines,calcium fluorescence intensity,cardiomyocyte apoptosis and related genes will be detected by radioimmunoassay, RT-PCR and other methods.The upstream activating matter MEKK5,MKK3,MKK6,p38MAPK,p-p38MAPK immunoreactive cells and content will be detected by immunohistochemistry and immunoblotting,and correlation analysis to explore the mechanism of the p38MAPK signaling pathway on myocardial ischemia reperfusion injury by electroacupuncture pretreatment,to further clarify the myocardial ischemia reperfusion injury mechanism and Neiguan heart related.The results of the research will provide new experimental evidence and new ideas on the myocardial ischemia clinical treatment and prevention of reperfusion injury.

基于心肌缺血再灌注损伤与p38MAPK信号通路密切相关，内关穴一直是针灸防治心脏疾病的经典穴和首选穴，在前期研究工作基础上，以心肌缺血再灌注损伤大鼠为研究对象，应用电针内关预处理和缺血预处理、药物（去甲肾上腺素）预处理三种预处理方法，观察电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨电针内关预处理的优势；应用p38MAPK信号通路抑制剂，采用放射免疫、RT-PCR等实验方法检测大鼠抗自由基酶、炎症细胞因子、Ca2+荧光强度、心肌细胞凋亡及相关基因；免疫组化及免疫印迹检测上游激活物MEKK5、MKK3、MKK6及p38MAPK、p-p38MAPK免疫阳性细胞表达和含量，并进行相关性分析，探讨p38MAPK信号通路在电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤发挥保护作用的机制，为内关心脏相关提供新的实验依据，并为临床防治心肌缺血再灌注损伤提供新的思路。

以心肌缺血再灌注损伤大鼠为研究对象，应用电针内关预处理和缺血预处理、药物预处理三种预处理方法，观察电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨电针内关预处理的优势。采用放射免疫、RT-PCR等实验方法检测大鼠抗自由基酶、炎症细胞因子、Ca2+荧光强度、心肌细胞凋亡及相关基因；免疫印迹检测上游激活物MKK3、MKK6及p38MAPK、p-p38MAPK免疫阳性细胞表达和含量，并进行相关性分析。结果表明电针内关预处理可显著改善受损心肌组织的病理损害程度，可使I/R模型大鼠LVEDP降低，LVSP、FS和EF升高，可降低血清中LDH、CK及cTnI的含量，保护大鼠心肌组织，改善大鼠心功能；能明显抑制IL-6等炎性因子的表达，增加IL-4和IL-10等抗炎因子的表达，下调心肌粘附分子ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达，通过调控炎症反应相关因子保护受损心肌组织；减少I/R模型大鼠心肌细胞ROS及MDA的含量，提高ATP含量，激活SOD和ATP酶的活性，改善RCR，通过保护线粒体结构和功能的完整性来减轻I/R中心肌损伤；明显抑制I/R中MKK3/6、p38MAPK的蛋白表达，抑制p38MAPK的磷酸化，对心肌细胞p38信号转导通路的调节是电针内关预处理保护I/R发挥其抗心肌缺血的作用机制之一。电针组与p38抑制剂组和电针+ p38抑制剂组、缺血预处理组和缺血预处理+抑制剂组、药物预处理组和药物预处理+抑制剂预处理组比较，对I/R大鼠模型相关指标结果的调控上可见明显差异，p38抑制剂组和电针+p38抑制剂组之间并未出现明显叠加效应，说明电针内关预处理对I/R的保护机制可能是多层次、多途径的综合效应。实验结果对临床治疗各种病因的心肌缺血再灌注损伤具有十分重要的理论意义和实用价值。