内源性危险信号在电针内关预处理减轻心肌缺血再灌注损伤中的作用研究

电针内关预处理可显著减轻心肌缺血再灌注（I/R）损伤，其机制与调节自主神经系统功能（神经机制）和抑制再灌注期炎性瀑布反应（免疫机制）有关，但两者之间是否有内在联系尚不清楚。最新研究表明，心肌缺血期内源性危险信号-高迁移率蛋白1（HMGB1）的过度释放是启动并维持再灌注期炎性瀑布反应的关键环节！而自主神经递质如乙酰胆碱被发现是体内极少数调控HMGB1释放的生理性物质之一。因此，HMGB1可能是电针内关经自主神经调控的关键靶点。本课题拟用大鼠心肌I/R模型，观察电针对HMGB1释放、交感和迷走神经功能及其递质释放、炎性介质、心肌损伤等的影响，并采用迷走神经切断、交感神经化学阻断、神经受体功能阻断等手段，明确HMGB1在电针心肌保护中的关键作用及其神经介导的调控机制。本研究将有助于从神经免疫调节角度深入阐释电针心肌保护作用机理，并为进一步优化针对内源性危险信号调控的电针治疗提供理论依据。

以往许多临床和动物研究显示，电针内关穴可以显著减轻心肌缺血再灌注损伤，相关的机制研究显示，这种保护作用与电针的免疫调节作用以及神经调节作用有关，但是这两种调节作用之间是否有内在的联系尚不清楚。本项目的研究假说是电针内关通过激活自主神经抑制心肌缺血期内源性危险信号—高迁移率蛋白1（HMGB1）的过度释放，进而减轻再灌注期的炎性瀑布反应，产生心肌保护作用，即对HMGB1的调节作用是电针心肌保护作用的神经和免疫调节机制之间的关键联系点。本研究采用小鼠心肌缺血再灌注模型显示：（1）电针内关预处理可以显著减少心肌I/R损伤后的心肌梗死面积；（2）免疫组化和蛋白免疫印迹结果显示，与非穴位电针组相比，电针组电针可显著减少心肌缺血30min，以及再灌注后0.5h，6h，24h HMGB1的释放；（3）切断单侧迷走神经，而不是化学交感阻断，可显著削弱电针的心肌保护作用以及对HMGB1的抑制作用；（4）胆碱能N受体阻断剂和α-7受体阻断剂可阻断电针的心肌保护作用和对HMGB1的抑制作用，而M受体阻断剂则无此作用；（5）离体研究结果显示，氧糖剥夺后，心肌细胞内HMGB1的浓度显著降低（79% vs 11%），而加入乙酰胆碱则可显示出了一定的保护作用（11% vs 31%），加入去甲肾上腺素，损害更加重（11% vs 3%）；与在体研究结果类似，N受体阻断剂，而不是M受体阻断剂可削弱乙酰胆碱对HMGB1的影响。本研究的结果表明，电针内关可激活迷走神经，释放乙酰胆碱，通过尼古丁α-7受体抑制心肌缺血期内源性危险信号HMGB1的释放，进而抑制再灌注期炎性反应，产生心肌保护作用。HMGB1是电针内关心肌保护的神经机制与免疫机制的关键连接点。