低密度脂蛋白受体相关蛋白4作为新抗原在诱导重症肌无力中的作用

Low density lipoprotein receptor-related protein 4 (Lrp4) is a transmemberane protein concentrated in the postsynaptic membranes of neuromuscular junction (NMJ). It acts as the receptor of agrin in inducing the formation and maintenance of acetylcholine receptor (AChR) clusters. It has been found that anti- Lrp4 antibody exists in 3%-50% of the myasthenia gravis (MG) patients with anti-AChR antibody (AChRAb) negative. So far it is still not clear that anti-Lrp4 antibody can mediate the pathogenesis of MG. In this study, the anti-Lrp4 antibody positive sera, determined from the MG patients with AChRAb negative, will be tested for the binding activity to antigen Lrp4 in the cultured cells transfected with Lrp4 gene and expressed in the cell membranes, as well as in the cryosection of rat skeletal muscles, and for the effects of inhibition on the AChR clusters induced by agrin. Furthermore, the cell-expressed extracellular domains of Lrp4 will be immunized in mice to induce active experimental autoimmune MG (EAMG) model, and the sera (or IgG) from MG patients with anti-Lrp4 antibody positive, and the monoclonal antibody (mAb) against Lrp4, isolated from EAMG mice, will be injected in rats to induce passive EAMG model for the determination of pathogenicity. This research will hold the promise for the clinical diagnosis and treatment of MG, especially the MG patients with AChRAb negative.

低密度脂蛋白受体相关蛋白4（Lrp4）是肌细胞膜上的一种跨膜蛋白质，作为聚集蛋白的受体，在乙酰胆碱受体（AChR）聚集和维持在突触后膜上形成神经肌肉接头中起促进作用。大约3%-50%的AChR抗体（AChRAb）阴性的重症肌无力（MG）患者存在抗Lrp4抗体，这些抗体能否介导MG的发病还不清楚。本研究筛选AChRAb阴性的MG患者测定其Lrp4抗体，将Lrp4抗体阳性的MG血清加入培养细胞以及大鼠肌肉冰冻切片上，观察其与Lrp4的结合活性；在培养肌细胞中观察Lrp4抗体对聚集蛋白诱导的AChR聚集的影响；注射大鼠诱导MG模型，以鉴定Lrp4抗体的致病性。将Lrp4及其Lrp4单克隆抗体，注射动物诱导MG模型，以测定其致病作用。通过对人和动物、单克隆抗体和多克隆抗体、体内和体外的系统性实验研究，探讨Lrp4及其抗体的致病作用及其机制，对临床诊断和治疗AChRAb阴性的患者，具有重要指导作用。

低密度脂蛋白受体相关蛋白4（Lrp4）是肌细胞膜上的一种跨膜蛋白质，作为聚集蛋白的受体，在乙酰胆碱受体（AChR）聚集和维持在突触后膜上形成神经肌肉接头中起促进作用。大约3%-50%的AChR抗体（AChRAb）阴性的重症肌无力（MG）患者存在抗Lrp4抗体，这些抗体能否介导MG的发病还不清楚。本研究以兔抗人Lrp4多克隆抗体注射小鼠诱导被动实验性自身免疫性MG（EAMG）模型，以Lrp4作为免疫原注射小鼠诱导主动EAMG模型。实验结果显示，实验动物的临床表现出现活动力减弱等肌无力症状及体征，免疫荧光实验检测发现肌肉组织中的神经肌肉接头处有抗体结合，并且电子显微镜观察该处超微结构出现MG的病理变化。我们的实验结果证明，Lrp4抗体是引起MG的致病性抗体，Lrp4作为一种新发现的抗原确实能引起MG。这对临床诊断和治疗AChRAb和MuSKA均为阴性的MG患者具有重要指导作用。