miR-152靶向Mirk/dyrk1b调控人卵巢癌干细胞化疗耐药的作用及机制研究

卵巢癌的病死率居妇科恶性肿瘤首位，化疗耐药是其预后不良的主要原因之一。肿瘤干细胞的存在是恶性肿瘤化疗耐药和复发的重要因素。我们的前期工作发现miR-152在卵巢癌干细胞中表达降低，上调miR-152可明显提高卵巢癌干细胞的化疗敏感性；通过生物信息学方法预测并初步验证了miR-152在卵巢癌干细胞中的靶基因Mirk/dyrk1b。本研究拟利用基因转染、药物敏感实验等技术研究miR-152对卵巢癌干细胞化疗耐药的影响，并应用荧光素酶报告基因实验确定其与靶基因Mirk/dyrk1b的关系，并试图阐明miR-152参与逆转耐药的可能机制，以期证明miR-152是一个新的卵巢癌干细胞化疗耐药相关分子，为深入阐述卵巢癌的耐药复发机理提供新的思路，为卵巢癌的治疗提供新的分子靶点。

我们进一步完善了卵巢癌干细胞的分离及稳定传代培养体系。在此基础上，通过脂质体转染技术构建miR-152在卵巢癌干细胞中差异表达体系，应用CCK-8实验、干细胞球形成实验证明miR-152表达上调能够增加卵巢癌干细胞对紫杉醇的敏感性、抑制卵巢癌干细胞团富集。应用生物信息技术预测Mirk/dyrk1b可能是miR-152靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验和Western blot方法证实miR-152能与Mirk/dyrk1b 3’UTR特异性结合、调控Mirk/dyrk1b表达水平，证明Mirk/dyrk1b是miR-152的靶基因。同时，我们检测了转染miR-152前后卵巢癌干细胞中活性氧簇（ROS）水平，发现miR-152能够显著提高ROS水平，推测miR-152靶向调控Mirk/dyrk1b影响卵巢癌干细胞化疗敏感性可能是通过提高细胞内活性氧水平实现的。此外，我们还检测了Mirk/dyrk1b在卵巢上皮癌中的表达情况，发现Mirk/dyrk1b在卵巢癌组织中呈高表达，其表达与卵巢癌的组织学分级及病理类型明显相关，提示Mirk/dyrk1b可能与卵巢癌的发生有关。综上，我们证明miR152通过靶向Mirk/dyrk1b调控卵巢癌干细胞化疗敏感性，而提高细胞内活性氧水平是其可能的机制之一。上述结果有助于我们进一步阐明卵巢癌化疗耐药的机制，为逆转卵巢癌化疗耐药寻找可能的分子靶点提供了新思路。