miR-19b调控CD4+T细胞分化的机制及其在哮喘发病中的作用

作为miR-17-92簇重要成员，miR-19b过表达小鼠CD4+T细胞Th1分化明显增强，但机制不明；我们通过microRNA表达谱芯片检测发现：哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC) miR-19b的表达较正常对照明显下调。SOCS1、SOCS3 3'UTR区域均存在miR-19b的保守结合位点，二者均能抑制CD4+T细胞Th1分化。我们推测：miR-19b的下调导致其靶基因SOCS1和SOCS3上调，导致Th1/Th2细胞因子失衡，从而参与哮喘发病。我们拟研究慢病毒介导的miR-19b过表达及封闭基因操作对哮喘小鼠发病及其Th1/Th2细胞因子的影响；通过双报告基因检测系统及体内体外实验验证miR-19b的靶点，观察 miR-19b在哮喘患者与健康对照者及在哮喘患者不同时期表达的差异。明确miR-19b调控CD4+T细胞的分化的机制及其在哮喘发病中的作用特点，将为治疗哮喘提供新的靶点。

哮喘是一种严重威胁人类健康的慢性气道炎症性疾病，其核心发病机制为Th1/Th2细胞因子失衡，相关研究表明：作为miR-17-92簇重要成员，miR-19b过表达小鼠CD4+T细胞Th1分化明显增强，我们课题组前期通过microRNA表达谱芯片检测发现：哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC) miR-19b的表达较正常对照明显下调。SOCS1、SOCS3 3'UTR区域均存在miR-19b的保守结合位点，二者均能抑制CD4+T细胞Th1分化。我们推测：miR-19b的下调导致其靶基因SOCS1和SOCS3上调，导致Th1/Th2细胞因子失衡，从而参与哮喘发病。.在成功构建哮喘小鼠模型的基础上，我们发现与对照组小鼠相比：哮喘小鼠淋巴细胞miR-19b低表达，而SOCS1、SOCS3高表达；通过双荧光素酶报告基因检测系统实验，我们发现miR-19b能够分别抑制含SOCS1、SOCS3 3'UTR的荧光素酶报告基因的荧光素酶活性；通过体外基因电转染实验，我们发现：与空白对照组比较，miR-19b低表达组SOCS1、SOCS3蛋白高表达，且其细胞内Th2细胞因子升高；而体内基因操作实验表明：慢病毒介导的miR-19b封闭基因操作能够增加哮喘小鼠淋巴细胞内IL-4的表达；临床标本研究初步表明：慢性持续期哮喘患者 miR-19b在哮喘患者外周血PBMC的表达较健康对照者期表达下降。通过该项目，我们初步明确miR-19b能够通过调控SOCS1、SOCS3 的表达调控CD4+T细胞的分化，miR-19b缺失会加重哮喘小鼠的发病，miR-19b可能会成为治疗哮喘的新的靶点。.气道重构是慢性哮喘的发病机制之一，在本课题研究的基础上，通过对人外周血PBMC miRNA表达谱芯片进行分层聚类分析，我们发现miR-29c低表达，通过（Gene Ontology, GO分类）、代谢通路分析(Pathway annotation)也即GO-Pathway对miR-29c进行靶基因综合预测分析，结果提示miR-29c主要参与细胞外基质组成、胶原合成、血管生成等气道重构密切相关的功能和信号通路，其在气道重构中的作用值得进一步研究。