IL-35在调控早孕蜕膜CD4+T细胞分化中的作用及其机制

Interleukin-35 (IL-35) is an immunosuppressive cytokine that is constitutively expressed by CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Tregs). IL-35 can suppress the proliferation of conventional CD4+Foxp3- T cells (Tconv) and convert suppressed target Tconv into IL-35-induced Treg (iTr35). Our previous study found that human trophoblasts in maternal-fetal interface of early placentas expressed and secreted soluble IL-35. However, both the effect of IL-35 secreted by trophoblasts and its suppressive mechanism remain unknown. Based on the above results, we will further explore the function of IL-35 on decidual CD4+ Tconv cells. In the present study, we will comprehensively analyze the suppressive activity of IL-35 on decidual Tconv cells, its ability to induce iTr35 and related signaling pathway. Meanwhile, the role of IL-35 in maintaining maternal-fetal immunotolerance will be verified in a murine model of spontaneous abortion. The results of this research will not only further improve the knowledge on biological function of IL-35, but also provide a new therapeutic target for pathological pregnancy.

IL-35是近年新发现的、具有免疫抑制功能的细胞因子，由Foxp3+Treg细胞产生，对效应性T细胞有显著的增殖抑制作用，并可诱导其转化为IL-35依赖的诱导调节性T细胞(iTr35)。我们在前期研究中发现，人胚胎滋养细胞也可表达分泌IL-35，但其是否在母胎免疫耐受的维持中发挥抑制作用及其机制是什么？尚无研究报道。本研究拟在前期结果的基础上，从滋养细胞分泌的IL-35对蜕膜CD4+T细胞功能的调控作用入手，采用Transwell实验、抗体阻断实验等技术手段分析IL-35对蜕膜CD4+T细胞分化及iTr35诱导能力的影响及其关键转录因子和主要信号通路；并通过建立小鼠易流产模型及动物体内实验进一步验证IL-35在母胎免疫耐受中的作用。本研究结果不仅是对IL-35功能研究的进一步完善和积累，也对阐明独特的母胎耐受及防御机制具有重要意义，并为临床病理性妊娠的防治提供新的治疗靶点和防治策略。

IL-35属于IL-12细胞因子家族，由Ebi3和p35两个亚基组成，具有免疫抑制作用，可显著抑制Teff的增殖并诱导其转化为IL-35依赖的诱导调节性T细胞（iTr35）。有研究证实，不同妊娠阶段的胎盘组织均可同时表达IL-35的两个亚单位成分Ebi3蛋白和p35蛋白。本课题组利用real time RT-PCR、ELISA、免疫组化和免疫荧光技术首次证实妊娠早期的绒毛滋养细胞及绒毛外滋养细胞也可表达和分泌IL-35，而相应的蜕膜基质细胞则表达阴性；妊娠早期外周血中IL-35水平明显高于健康非妊娠者。CCK8实验结果显示滋养细胞上清可显著抑制Teff的增殖，并且这种增殖抑制作用可被IL-35中和抗体所逆转；Real time RT-PCR、流式细胞术和Western blot则在转录水平和蛋白水平上分别证实滋养细胞上清可以诱导Teff转化为iTr35，而且滋养细胞来源IL-35的这种增殖抑制和诱导分化作用是通过激活Teff细胞JAK/STAT通路的重要蛋白-STAT1和STAT3实现的。易流产动物模型及体内试验证实，正常妊娠小鼠胎盘组织及蜕膜CD4+T细胞中IL-35水平显著高于流产小鼠。本研究首次报道了绒毛滋养细胞分泌的IL-35在妊娠局部免疫微环境中表达及发挥作用的分子机制，对阐明独特的母胎耐受及防御机制，补充并建立新的免疫耐受理论具有重要意义。部分研究结果发表标注SCI文章4篇，尚有2篇文章整理待投稿。