肿瘤坏死因子受体2调控CD4+T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用及机制研究

Abnormal number and function of CD4+CD25+ regulatory T cells affects the differentiation of CD4+T cells in asthma, but the mechanism has not been clarified. Recent evidence indicates that tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) plays an important role in the differentiation, function and stability of Tregs. We found by the experiments, TNFR2 expression was significantly reduced in the thymus, spleen and lung draining lymph node in asthmatic mice. We hypothesized that abnormal expression of TNFR2 caused the defects of Tregs differentiation. To this end, we will establish a mouse model of asthma, in vitro and in vivo, to observe the effect of TNFR2 inhibitor on airway inflammation in asthma. secondly, we will observe Tregs, Th2 and Th17 differentiation by Inhibition of TNFR2 signaling, to understand the role of TNFR2 signaling in CD4+T lymphocytes differentiation in asthma. Finally, we will observe the effects of TNF/TNFR2 signal on the asthmatic airway inflammation and the differentiation and function of Tregs, to further clarify the possible mechanism of TNFR2 signaling in CD4+T lymphocytes differentiation. The results of this study will provide ideas and theoretical basis for exploring new treatment of asthma.

哮喘时CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）的数量及功能的异常影响了CD4+T淋巴细胞分化，但机制尚未阐明。新近研究证实，肿瘤坏死因子受体2（TNFR2）在Tregs的分化、功能及稳定性上具有重要作用。我们通过预实验发现，哮喘小鼠的胸腺、脾及肺引流淋巴结组织中，TNFR2的表达均较对照组显著减少。我们假设，哮喘时TNFR2表达的异常导致了Tregs分化的缺陷。为此，我们将建立哮喘小鼠模型，通过体内和体外实验，观察抑制TNFR2信号对哮喘气道炎症的影响；其次，通过观察抑制TNFR2信号对Tregs、Th2和Th17分化的影响，明确TNFR2信号在哮喘CD4+T淋巴细胞分化中的作用；最后，通过观察TNF/TNFR2信号对哮喘气道炎症及Tregs分化及功能的影响，进一步明确TNFR2信号调控哮喘CD4+T淋巴细胞分化的可能机制。本研究的成果将为探索哮喘新的治疗方法提供思路和理论依据。

CD4 + T细胞分化的不平衡在哮喘的发病中起着重要作用。近期研究显示肿瘤坏死因子受体2（TNFR2）参与调节CD4 + T淋巴细胞的分化，但其在哮喘中的作用尚不清楚。因此，我们的研究主要探讨TNFR2信号在哮喘过敏性气道炎症中的作用。首先，我们产生小鼠哮喘模型，并通过鼻腔给药TNFR2抗体。通过体内和体外实验测定气道炎症和CD4 + T细胞的分化的情况。结果显示，阻断TNFR2信号加重了哮喘小鼠的气道炎症，同时支气管肺泡灌洗液中相关炎症细胞因子的分泌也显著增加（白细胞介素-4、IL-5、IL-17、TNF-α）。进一步的结果表明，缺乏TNFR2信号促进Th2和Th17细胞分化，同时抑制Th1细胞和Treg分化。此外，体外实验显示，TNFR2信号的抑制促进Th2和Th17分化，可能与TNF受体相关因子2（TRAF2）信号的过度活化及核因子（NF）-κB信号的激活相关。接着，我们研究了活化TNFR2信号在过敏性气道炎症中的作用。TNFR2信号的活化是通过加入TNF-α配体和封闭TNFR1信号来实现。小鼠的气道炎症情况通过HE和PAS染色来评估。采用ELISA法分析血清和BALF中的炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-17、IL-10。CD4+T细胞的分化采用流式细胞仪检测术和Western印迹检测转录因子T-bet，GATA-3，RORγ和Foxp3的表达。结果显示，TNFR2活化缓解过敏性气道炎症，其机制可能与对Th2和Th17细胞分化的抑制作用相关。因此，我们的研究结果表明TNFR2信号在过敏性气道炎症的抗炎作用，上调TNFR2表达可能改善哮喘的严重程度。