益气调血化痰方药干预AMD脉络膜新生血管VEGF/VEGFR的调控研究

渗出型AMD的特点是脉络膜新生血管形成。前期研究工作证实益气调血化痰方药能够抑制渗出型AMD脉络膜新生血管的生长。项目组在取得初步结论的基础上，拟进行深入实验研究，观察益气调血化痰方药抑制脉络膜新生血管形成的有效性，并探讨益气调血化痰方药是否通过调控VEGF和VEGFR而发挥作用。研究拟选用激光诱导的脉络膜新生血管大鼠模型；采用眼底荧光血管造影动态观察脉络膜新生血管生长情况；从形态学层面观察脉络膜新生血管组织结构和细胞超微结构；从细胞分子水平应用免疫组化技术检测脉络膜新生血管细胞VEGF和VEGFR蛋白表达的变化，运用RT-PCR技术检测脉络膜、视网膜组织VEGF和VEGFRmRNA的改变。评价益气调血化痰方药抑制脉络膜新生血管形成的作用；揭示益气调血化痰方药干预VEGF和VEGFR在蛋白及基因转录水平上的表达特征。旨在为益气调血化痰方药干预渗出型AMD在临床应用提供可靠的实验依据。

背景：脉络膜新生血管（CNV）是渗出性年龄相关性黄斑变性（AMD）的主要病变特点。国内外研究已经证明，VEGF和VEGFR参与CNV形成，针对其进行的靶向治疗CNV的主要关注点。目前已有抑制VEGF的药物应用于临床，但是在临床应用上仍存在局限性。方向：项目组在前期临床工作中已经证实益气调血化痰方药能够抑制CNV的生成，在此基础上进行更深层次的实验研究。主要内容：建立激光诱导的CNV大鼠模型，采用FFA动态观察CNV的生长情况，从形态学方面观察CNV的组织结构和细胞超微结构，应用免疫组化、RT-PCR技术检测VEGF/VEGFR在蛋白和基因转录水平上的变化。结果：1.项目组采用激光光凝BN大鼠的视网膜，击穿Bruch膜，以产生气泡为标志，成功建立了激光诱导的CNV大鼠模型；2. 光凝后7天的FFA显示，中药组荧光渗漏范围明显小于模型组及对照组(P＜0.05）。光凝后14天、21天的FFA显示，中药组荧光渗漏范围明显小于模型组(P14＜0.05，P21＜0.05），与对照组相比无统计学差异（P14＞0.05，P21＞0.05）。3.病理形态结果显示：中药组光凝区内视网膜和脉络膜浅层毛细血管层损伤、结构紊乱较轻。光凝区内可见新生血管较少，分层增殖迁移的RPE细胞、成纤维细胞和胶原纤维。CNV中央厚度较模型组明显缩小（P＜0.05），与对照组相比没有显著性差异（P＞0.05）。中药组CNV面积较模型组明显缩小（P＜0.05），与对照组相比没有明显差异（P＞0.05）。4.从蛋白及mRNA水平上看，众多因素中抑制VEGF-A和VEGFR-2的结合可能是益气调血化痰方抑制CNV的发生的主要作用机制.结论：通过益气调血化痰方药干预CNV的模式生物研究，证明益气调血化痰方药对CNV的抑制作用是通过调控VEGF/VEGFR实现的，为益气调血化痰方药干预渗出性年龄相关性黄斑变性提供了可靠的实验依据。