基于VEGF上下游调控通路探讨杞黄颗粒对脉络膜新生血管形成的干预机制

Choroidal neovascularization is the important cause of blindness for age-related macular degeneration （AMD）. It is known that VEGF plays the most important role in the development of CNV. The angiogenic effect of VEGF is regulated by the upstream pathway, hypoxia inducible factor ( HIF-1 ), and the downstream pathways, intercellular adhesion molecule -1 ( ICAM-1 ), and other factors. Our preliminary study shows Qihuang granule is effective for AMD. This project is planned to make mice of CNV model,which is induced by 532 nm laser photocoagulation, estimate the area of CNV in RPE-choroid-sclera fiat mounts with laser confocal microscopy ,observe dynamically the changes of CNV by Fundus fluorescein angiography and indocyanine green angiography, optical coherence tomography ,and detect the protein content and mRNA level of HIF-1, VEGF and ICAM-1 by Western blot Technology and RT-PCR, then analyse the regulatory role of drugs on VEGF upstream and downstream pathway . This project plan to study the intervention mechanism of traditional Chinese medicine on CNV in order to provide more theoretical support for the treatment of Qihuang granule on wet AMD.

脉络膜新生血管（CNV）是年龄相关性黄斑变性（AMD）致盲的根源。近年发现血管内皮生长因子（VEGF）是形成CNV功能最强的促进因子，VEGF促血管生成受上游通路缺氧诱导因子（HIF-1）和下游通路细胞粘附分子-1（ICAM-1）等多因素调控。我们前期研究显示杞黄颗粒对AMD患者临床有效，并对实验性视网膜光损伤病理损害有保护作用。本项目拟采用532激光制作大鼠CNV动物模型，激光共焦显微镜评估RPE一脉络膜一巩膜铺片CNV面积，眼底荧光血管造影-吲哚青绿血管造影、光学相干断层扫描动态观察CNV变化， Western blot技术分析HIF-1、VEGF和ICAM-1蛋白含量， Rea1-time PCR分析HIF-1α、VEGF、 ICAM-1mRNA表达水平，观察药物对VEGF上下游通路主要调控因子的影响，以期探明对CNV的干预机制,为杞黄颗粒治疗湿性AMD提供理论支撑。

【项目背景】年龄相关性黄斑变性（AMD）是主要致盲眼病之一，脉络膜新生血管（CNV）是AMD失明的根源。我们前期研究显示杞黄颗粒对AMD患者临床有效，并对实验性视网膜光损伤病理损害有保护作用。.【研究内容】观察杞黄颗粒对VEGF上下游通路主要调控因子的影响，以期探明对CNV的干预机制。.【重要结果】.1.杞黄颗粒与雷珠单抗联合使用，对于VEGF的表达有明显的调节作用，能够减少CNV的形成。.2.杞黄颗粒联合雷珠单抗在抑制脉络膜新生血管中下调HIF-1蛋白含量及基因表达效果更加稳定。.3.雷珠单抗对ICAM-1的高表达有抑制作用，杞黄颗粒+雷珠单抗长时间联合使用的效果更好。.【关键数据】.1.激光成果诱导大鼠CNV模型，60天各组RPE-脉络膜-巩膜复合体中VEGF蛋白含量的表达：杞黄+雷珠组相比模型组VEGF的蛋白含量有所降低（P<0.05），杞黄+雷珠组相比杞黄A组VEGF的蛋白含量明显降低（P<0.05），VEGF蛋白含量的表达：杞黄B组相比杞黄A组的VEGF蛋白含量有所降低（P<0.05）。60天各组VEGFmRNA表达：杞黄+雷珠组相比模型组VEGF mRNA有所降低（P<0.05）。杞黄颗粒90天组相比60天组的VEGF mRNA有明显降低（P<0.05）。.2.杞黄颗粒组90天与60天HIF-1差异有统计学意义（P＜0.05）。杞黄颗粒A组表达高于雷珠单抗组（P＜0.01）和杞黄颗粒+雷珠单抗组（P＜0.001），有极显著性意义，杞黄颗粒组90天与60天比较差异有极显著性统计学意义（P＜0.001）。.3.ICAM-1蛋白的表达，模型组、杞黄颗粒组和雷珠单抗组ICAM-1mRNA表达均高于杞黄颗粒+雷珠单抗组（P＜0.05）；杞黄颗粒组和雷珠单抗组ICAM-1基因表达相比（P＜0.01）；90天杞黄颗粒组ICAM-1表达低于60天杞黄颗粒组（P＜0.01）。.【科学意义】.VEGF高表达及其上下游调控因子通路的过度表达都是CNV形成的主要原因，本项目研究主要证实杞黄颗粒对于VEGF的表达有明显的调节作用，与雷珠单抗联合使用效果明显，能够下调上游因子HIF-1蛋白含量及基因表达，下调VEGF下游通路ICAM-1表达，减少CNV的形成。充分显示出杞黄颗粒治疗湿性AMD的科学依据。对有序研究和开发AMD的中医药治疗方药具有深远意义。