基于IL-17RC甲基化的益气调血化痰方药干预年龄相关性黄斑变性的作用机制研究

Age-related macular degeneration (AMD), one of the refractory ocular diseases, is the most common cause of irreversible blindness. Anti-VEGF drugs, such as Lucentis, has already been approved for the treatment of Wet-form AMD. Unfortunately, these drugs need vitreous administrations over and over again. Reducing the recurrence of choroidal neovascularization (CNV) is also a critical problem. Currently there are no effective therapies. We recently showed that the traditional Chinese medicine (TCM) formula of YiqiTiaoxueHuatan reduced CNV in AMD patients. In addition, our previous epigenetic study also identified DNA hypomethylation in IL-17RC promoter was the key pathogenesis in AMD multiple pathological links. Therefore, we propose to further study this project. Considering the DNA methylation status of IL-17RC promoter as the main pathological characteristic in AMD, we hereby use laser induced CNV BN rats models and AMD patients, observe the histological changes and difference of IL-17RC expression and DNA methylation status between intervention group and normal control group, intend to connect YiqiTiaoxueHuatan formula effect on IL-17RC promoter methylation with AMD pathological progress, uncover the adjustment mechanisms, establish the evidence of YiqiTiaoxueHuatan formula effect on AMD treatment, and raise the evidence level of Chinese Traditional medicine intervention in AMD.

年龄相关性黄斑变性（AMD）为眼科领域难治性眼病。尽管抗-VEGF药已用于治疗湿性AMD，但需通过玻璃体腔反复给药抑制CNV发展，控制CNV复发仍是关键问题。目前临床缺少有效药物和治疗手段。我们前期工作证实益气调血化痰方药能抑制AMD脉络膜新生血管形成；研究发现AMD多元病理环节中IL-17RC启动子DNA低甲基化是关键病理。项目组在取得初步结论基础上，拟进行深入实验研究，选择 AMD患者和激光诱导CNV的BN大鼠模型为研究对象，围绕IL-17RC启动子甲基化的AMD关键病理，观察中药干预组与阳性对照组AMD-CNV动态改变和模型的病理形态变化、IL-17RC表达及甲基化的差异，验证益气调血化痰方药影响IL-17RC启动子甲基化与AMD病理演变的关联性；揭示益气调血化痰方药调节IL-17RC启动子甲基化的作用机制，建立益气调血化痰方药干预AMD的有效性证据。提升中药干预AMD的证据水平

年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人的主要致盲眼病，我国 45 岁以上人群患病率为6~17%。慢性炎症是不同类型AMD 发生的共同环节。炎症促进VEGF 的高表达可导致湿性AMD 的CNV 形成。目前临床仍缺少有效根治AMD 的药物。本项目合作者的表观遗传学最新研究发现IL-17RC DNA低甲基化导致IL-17RC 高表达引起下游炎症级联反应是AMD 发生的关键上游环节。我们前期研究发现益气调血化痰方药能通过抑制炎症、降低VEGF 表达、阻止CNV 形成而有效治疗AMD，推测其上游作用机制可能与调控IL-17RC DNA 甲基化修饰密切相关。本项目通过通过收集用药前后AMD患者的病例资料，进一步证实益气调血化痰方能明显提高湿性AMD患者的视力，促进黄斑区出血、渗出的吸收。收集患者治疗前后的血液标本，采用表观遗传学、流式细胞学等分子生物学技术发现究用药前后对外周血以及淋巴细胞系中IL-17RC的表达及 DNA 甲基化修饰在对照组、湿性AMD中并无差别，这可能与人种差异有关。并利用CCK8、PCR、ELISA等细胞和分子生物技术检测益气调血化痰方及其主要成分对IL-17A刺激下ARPE-19分泌炎性相关因子的影响，结果发现其能从mRNA和蛋白水平明显抑制 IL-17A刺激诱导ARPE-19细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8、CCL2、CCL20。结论：本次研究并未发现益气调血化痰方能外周血以及淋巴细胞系中IL-17RC DNA 甲基化修饰，但证实该方药及其主要成分可能通过干预IL-17的炎性刺激反应发挥治疗作用，这为益气调血化痰方治疗湿性AMD的机制提供了科学的证据。