硫化氢对大鼠肝星状细胞氧应激分子机制的研究

肝纤维化是继发于各种慢性肝损伤之后组织修复过程中的代偿反应,是慢性肝病发展为肝硬化必经的病理过程，肝纤维化的中心环节肝星状细胞氧化应激是慢性肝病的研究热点之一。根据我们先前对硫化氢在大鼠中肝缺血再灌注损伤研究中证实硫化氢具有抗氧化和细胞保护作用，结合当前本领域的研究进展，提出内源性的硫化氢具有抗氧化应激、调控肝星状细胞氧化应激反应的工作设想，拟在细胞分子生物学水平，采用大鼠肝星状细胞作为研究对象，以Fe-NTa引起铁超载的HSC细胞作为氧应激模型，应用硫化氢供体NaSH和KATP通道抑制剂格列本脲干预下研究HSC增殖、细胞周期、氧应激损伤、收缩迁移、胞内Ca2+的影响，确立硫化氢作用的MAPK（ERK、p38，c-JUN）信号通路的靶点，论证氧应激下硫化氢对HSC细胞具有保护作用的假说及其作用机制，进一步探讨硫化氢在肝脏氧化应激损伤的分子学机制，以期探寻肝硬化发生和防治的新策略。

本研究采用大鼠肝星状细胞作为研究对象，以Fe-NTa 引起铁超载的HSC 细胞作为氧应激模型，应用硫化氢供体NaSH 和KATP 通道抑制剂格列本脲干预下研究HSC 增殖、细胞周期、氧应激损伤、收缩迁移、胞内Ca2+的影响，确立硫化氢作用的MAPK（ERK、p38，c-JUN）信号通路的靶点，论证氧应激下硫化氢对HSC 细胞具有保护作用的假说及其作用机制，进一步探讨硫化氢在肝脏氧化应激损伤的分子学机制，以期探寻肝硬化发生和防治的新策略。.通过本研究：.1.一定浓度的H2S对HSC增殖有抑制作用。在FeNTA诱导的氧应激反应中,一定浓度范围的H2S可有效提高SOD的活性和降低MDA含量。H2S对HSC增殖有较强抑制作用,对FeNTA诱导的氧应激具有保护作用。提示与FeNTA组比较，NaHS组SOD、 GSH 、TAOC随剂量呈不同程度的升高，MDA、GSSH、ROS则呈不同程度的降低；GLBN组SOD、GSH、TAOC随剂量有不同程度的降低，MDA、GSSG、ROS则有不同程度的升高。H2S对铁超载下大鼠HSC-T6具有抗氧化作用，其机制可能与KATP通道开放，降低钙超载有关。2.利用铁超载体外培养细胞的氧化应激模型,给予不同浓度的外源性H2S供体NaHS和KATP通道阻断剂格列本脲，用MTT检测各组细胞的生长曲线;用敏感硫电极检测各组细胞上清液中H2S含量的变化。给予FeNTA后HSC增殖,其OD值随着NaHS浓度的增加和时间的延长而下调;给予GLBN后细胞增殖情况与前者相反;细胞增殖下调时细胞上清液和裂解液中的H2S含量升高,细胞增殖上调时H2S含量降低。H2S在氧化应激下能抑制HSC增殖,具有细胞保护作用。H2S能够在一定范围内减少氧化损伤,提高抗氧化能力,对肝纤维化具有一定的保护作用。3.给予不同剂量的外源性 H2S 供体硫氢化钠和 KATP 通道抑制剂格列本脲作用于 HSC － T6。提取培养后的HSC 细胞，ERK、p-ERK、P-38、p-p38、JNK、p-JNK的变化，NaSH能够通过抑制p38发挥抑制细胞增值的效果，而不是通过ERK、JUN等发挥增值抑制作用的。4.硫化氢能够通过抑制细胞黏附、增加HSC 跨膜迁移数量，同时增加细胞内Ca2+ 浓度。H2S在氧化应激下能促进HSC的收缩,具有细胞保护作用。具有剂量和时间的依赖性。