内质网应激对肝纤维化恢复期肝星状细胞凋亡的调控机制研究

前期研究表明，肝纤维化（HF）的病理过程是可逆的。肝纤维化进展期，星状细胞（HSC）异常增殖，恢复期HSC凋亡增加，可由TRAIL经线粒体途径诱导。内质网应激（ERS）是细胞应激的重要组成部分，适当的ERS可促进细胞增殖而过度的ERS与线粒体途径共同参与诱导细胞凋亡。肝纤维化进展期到恢复期，HSC由增殖到凋亡的转变是否与ERS的动态变化存在内在联系？ERS在肝纤维化恢复期是否参与HSC凋亡的调控？为此本实验选用CCl4诱导的大鼠HF模型，观察肝纤维化进展期、恢复期HSC内ERS动态变化；探讨ERS对HF恢复期HSC凋亡的调控及其HSC内信号传导通路，探讨ERS在HF发病及逆转中的作用和机制。在此基础上，进一步探讨恢复期ERS启动的HSC凋亡机制与课题组前期研究的TRAIL诱导HSC凋亡是否存在内在联系，关系如何？以此寻找针对ERS及其细胞内通路新的靶点，为HF的治疗及开发新的药物提供思路。

实验室前期研究发现在肝纤维化逆转恢复期枯否细胞可通过分泌TRAIL经由线粒体途径诱导活化的HSC凋亡，从而逆转肝纤维化。其确切的作用机制不明。内质网应激是除死亡受体及线粒体通路之外的第三条凋亡通路。其在肝纤维化病程中如何变化，是否参与活化HSC的凋亡，与TRAIL诱导的凋亡之间是否存在联系？为此，本课题主要研究内质网应激在肝纤维化逆转恢复期对HSC凋亡的调控，探讨其在HSC内可能的信号传导通路，进一步研究在肝纤维化逆转恢复期TRAIL与ERS诱导的HSC凋亡的相互关系，ERS对枯否细胞分泌TRAIL的调控作用及机制，为进一步明确肝纤维化的发病机制提供依据。.本研究主要分为四个部分：.1、肝纤维化自愈模型的建立及分期，动态观察肝纤维化各期HSC内质网应激相关蛋白Casepase-12，CHOP，GRP78的表达变化；.2、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing-ligand, TRAIL）通过ERS对活化的HSC凋亡的调控及部分机制的研究，结果发现ERS标志性蛋白CHOP可诱导TRAIL受体DR5的表达明显上调，CHOP和JNK可能是调节 DR5表达的潜在因子。同时还发现TRAIL可能通过诱导PDGF活化的HSC中内质网应激相关蛋白CHOP，GRP78，Caspase-12的表达，从而促进HSC的凋亡；.3、肝纤维化逆转恢复期内质网应激相关蛋白诱导HSC凋亡作用研究及信号传导通路研究，结果发现ERS参与活化HSC凋亡的调控，其机制可能与其释放细胞内钙离子，导致细胞内钙离子升高，从而诱导Calpain/Caspase和JNK/p38 MAPK激活有关；.4、ERS诱导RAW 264.7巨噬细胞株中TRAIL的表达及机制研究，结果发现JNK/AP-1信号通路参与内质网应激诱导的RAW 264.7巨噬细胞株中TRAIL表达的调控，SOCS3通过JNK/AP-1信号通路负调控ERS诱导的RAW 264.7巨噬细胞株TRAIL表达。