芳香烃受体对肝星状细胞活化的影响及分子机制

芳香烃受体(AhR)为配体激活转录因子，研究发现在缺乏外源性配体的条件下，AhR敲除的小鼠出现肝纤维化，肝脏转化生长因子β（TGFβ）、潜在TGF结合蛋白（LTBP）表达增加。已知肝星状细胞（HSC）激活是肝纤维化发生的关键，而LTBP和TGFβ是HSC激活的重要因素，且LTBP的表达可调控TGFβ的活性。我们的前期研究发现活化HSC 中AhR及其控制的CYP450同工酶表达降低。因此我们推测AhR的降低可能致HSC中LTBP表达升高，而后刺激TGFβ的分泌，诱导HSC活化，引起肝纤维化。本研究拟建立过表达或低表达AhR基因转染的HSC细胞株，观察不同AhR水平对HSC活化的影响，并通过特异性抗体处理，确定AhR可能通过LTBP-TGFβ-SMAD通路影响HSC活化，以此揭示AhR敲除后引起肝纤维化的机制，进一步确定AhR是否为内源性的肝纤维化保护因子，为肝纤维化的防治提供新的研究思路。

芳香烃受体(AhR)为配体激活转录因子，研究发现在缺乏外源性配体的条件下，AhR敲除的小鼠出现肝纤维化，其机制尚不清楚。肝纤维化是各种病因引起慢性肝损害并逐渐演变为肝硬化的中间环节，肝星状细胞激活是肝纤维化发生的关键。本研究在观察人肝星状细胞LX-2细胞AhR基础表达和功能的基础上，建立低表达和高表达AhR的HSC细胞株，观察不同AhR水平对HSC活化的影响及LTBP-TGF-beta-SMAD信号通路的影响。研究结果表明，肝星状细胞可表达一定量的AhR，但AhR的经典配体DMBA在诱导LX-2活化的情况下，并不能活化AhR，诱导CYP1B1和CYP1A1的表达。通过小RNA干扰可使LX-2中AhR mRNA表达降低59% ，其蛋白表达水平明显下降，CYP1B1mRNA表达也降低。同时LX-2中肝星状细胞活化标志alpha-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）和LTBP1 mRNA和蛋白表达明显增加，TGF-beta mRNA表达也明显增加。通过AhR表达载体转染至LX-2中，可显著升高LX-2中AhR mRNA和蛋白表达水平。alpha-SMA和LTBP1 mRNA和蛋白表达则显著降低，同时TGF-beta mRNA表达也明显降低。我们同时也检测不同AhR水平下TGF-beta-SMAD信号通路中SMAD2/3分子的磷酸化，发现其变化不明显。我们的研究提示肝星状细胞中AhR可负性调控LX-2活化。其研究意义在于揭示AhR敲除后引起肝纤维化的机制，进一步确定肝星状细胞中AhR可能为内源性的肝纤维化保护因子，为肝纤维化的防治提供新的研究思路，为人类有效地抑制或阻断肝星状细胞激活，防治肝纤维化、肝硬化发生和发展，提供新的研究方向和有价值的研究结果。