TFDP3诱导的自噬效应在激素非依赖性前列腺癌形成中的作用

Androgen-independent prostate cancer (AIPC) is a lethal form of prostate cancer most fail in clinical treatment.It was suggested that LNCaP cells can resort to the autophagic pathway in the transition of prostate cancer cells from an androgen-dependent to an androgen-independent cell type. But the mechanisms are not much clear. In our studies, TFDP3 was identified as a regulator of E2Fs to suppress apoptosis induced by E2F1. Also it could induce high expression of autophagic molecule LC3, and help more LNCaP cell survival.Throuth the further study of TFDP3 promoter region transcription binding site found that TFDP3 can be regulated by the E2F and CREB. So we hypothesized that the autophagy induced by TFDP3 might have a important role in AIPC formation.Meanwhile TFDP3 can be regulated by the E2F and CREB. In this study, we would use molecular biologic and cellular methods such as RNAi, fluorescent report system, con-focal and flow cytometry to demonstrate the regulation mechanism of TFDP3, the induction mechanism of autophagy, and the pathway downstream of TFDP3. It would not only be much helpful to understand how the AIPC could be survival, but also suggest some new clues for treatment strategy.

激素非依赖前列腺癌（AIPC）是临床治疗的重大难题，自噬在激素依赖的前列腺癌转变成AIPC过程中具有重要的保护作用，但其分子机制尚不清楚。我们前期研究发现TFDP3是E2F1的直接调控因子，不仅可抑制E2F1诱导的增殖活性及细胞凋亡作用；且可诱导前列腺癌细胞的自噬作用、提高LNCaP的生存能力。通过进一步对TFDP3启动子区转录结合位点的分析，发现TFDP3可被E2F和CREB调控。据此我们推测，TFDP3诱导的自噬可能是前列腺癌由激素依赖转变为非依赖过程中的重要保护机制之一。同时TFDP3受E2F和CREB的调控。故本项目拟以TFDP3为研究对象，采用RNAi、荧光素酶报告系统、激光共聚焦分析，流式细胞术等方法，研究TFDP3的表达调控及其诱导细胞自噬的分子机制，揭示AIPC耐受激素缺失的部分规律，阐明下调TFDP3表达在AIPC治疗中的作用，为寻求AIPC新的治疗手段提供科学依据。

激素非依赖性前列腺癌（AIPC）是临床治疗中的一个重要难题，多种生理功能的紊乱参与其中。TFDP3是一个新的E2F1的直接调控因子，它不仅可以抑制E2F1诱导的增殖活性，还具有抑制E2F1诱导细胞凋亡的作用；并且可以诱导前列腺癌细胞自噬作用；提高激素以来的前列腺癌细胞Lncap的生存能力。在本项研究中通过应用双荧光素酶报告系统和CHIP鉴定TFDP3的转录调节蛋白，明确E2F1和CREB可以结合TFDP3的启动子，而对TFDP3发挥转录调节功能，然后在籍以细胞转染E2F1和CREB的实验，证明E2F1和CREB可以上调TFDP3在转录水平和蛋白水平的表达；利用免疫组化、Western bot和定量PCR分析了三者在前列腺癌标本中的表达情况，证实了三者在前列腺癌中的高表达。以激素依赖的前列腺癌细胞系LNCaP为模型，去雄培养的条件下检测E2F1、CREB以及TFDP3的表达水平，提示其可能在AIPC的形成过程中发挥功能；为探讨三者对前列腺癌功能的影响，做了多方面的功能检测进而辨明TFDP3对AIPC的保护作用。研究发现TFDP3可以抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡并且促进增殖；同样CREB在前列腺癌细胞中也发挥着与TFDP3相类似的功能，CREB可以诱导前列腺癌细胞的增殖，并且可能通过促进前列腺癌细胞增殖相关蛋白PCNA的表达发挥功能；TFDP3可以诱导LNcap细胞中自噬基因LC3B的表达，而E2F1可以抑制TFDP3对自噬基因LC3B的这种诱导作用；通过划痕和侵袭实验证明，TFDP3可以促进前列腺癌细胞侵袭能力，但对转移却有负向作用，而CREB同样在前列腺癌EMT中发挥重要功能；CREB在TAM相关的前列腺癌细胞生长中也发挥着作用；通过敲减TFDP3发现干扰TFDP3的表达后可以使细胞阻滞与G1期，为开发以TFDP3为靶点抗癌药物提供新的理论依据。