PMSA适配子-穿膜肽靶向高效递送系统介导的siRNA抗前列腺癌实验研究

RNAi是具有广阔应用前景的肿瘤治疗新技术，但临床应用的瓶颈之一在于siRNA细胞摄取效率低下和缺乏组织特异性。本研究在课题组已开展survivin基因沉默研究基础上，基于PSMA适配子(aptamer)的前列腺癌特异性及TAT高效穿膜特性，拟构建TAT、双链RNA结合域（DRBD）与链霉亲和素（SA）融合蛋白SA-TAT-DRBD，借助DRBD与siRNA的结合克服负电荷对TAT构象的影响，确保TAT跨膜递送的高效性；进而通过生物素使PMSA适配子和SA-TAT-DRBD融合蛋白进行偶联，探索PSMA适配子-SA-TAT-DRBD-siRNA偶联物在体内外的抗前列腺癌作用。该策略的优势在于既解决了siRNA的肿瘤靶向性又提高了其递送高效性。旨在获得一种前列腺癌靶向、高效的siRNA递送系统，提高其对PMSA表达阳性肿瘤的杀伤效果。为RNAi技术在前列腺癌等疾病治疗中的应用探索新途。

RNAi是具有广阔应用前景的肿瘤治疗新技术，但临床应用的瓶颈之一在于siRNA细胞摄取效率低下和缺乏组织特异性。本研究在课题组已开展survivin基因沉默研究基础上，基于PSMA适配子(aptamer A10)的前列腺癌特异性及TAT高效穿膜特性，拟构建TAT、双链RNA结合域（DRBD）与链霉亲和素（SA）融合蛋白SA-TAT-DRBD（STD），借助DRBD与siRNA的结合克服负电荷对TAT构象的影响，确保TAT跨膜递送的高效性；进而通过生物素使PMSA适配子和SA-TAT-DRBD融合蛋白进行偶联。.经EMSA实验验证，适配子A10与靶向survivin基因的survivin-siRNA能有效与融合蛋白STD结合，PSMA适配子-SA-TAT-DRBD-siRNA复合物构建成功。体外及体内实验验证该复合物能特性性靶向PSMA阳性的LNCaP细胞，而不与PSMA阴性的细胞结合。激光共聚焦实验显示复合物在LNCap细胞胞质内聚集，证明该复合体系能有效转运siRNA至胞内。流式细胞术证明与对照转染试剂脂质体2000以及A10-siRNA嵌合体比较，siRNA转染效率分别提高19.2%和59.9%。此外，为证明该复合体系的前列腺癌细胞杀伤效应，western blot及RT-PCR证实复合体组survivin表达下调，细胞凋亡实验证实复合体组与两个对照组比凋亡率分别提高16.8%及26.1%。经尾静脉注射，荷瘤裸鼠体外生长曲线实验证实复合物组能抑制肿瘤生长，较其他组有明显优势（p <0.001）。综上，本课题证实该偶联策略有效，能促进survivin-siRNA PMSA表达阳性前列腺癌的靶向性和跨膜转运特异性，提高其对肿瘤的杀伤效果，为RNAi技术在前列腺癌等疾病治疗中的应用探索新途径。