中药野拔子基于神经血管单元RAGE信号通路防治AD机制研究

阿尔茨海默病（AD）严重危害人类健康，发病机制极为复杂。本课题在前期自然科学基金支持下，揭示了该病与神经血管单元（NVU）的功能改变密切相关，证明了晚期糖基化终末产物受体（RAGE）广泛参与该病Aβ介导的NVU损伤机制。近期又发现中药野拔子有效活性成分能够提高AD动物的学习记忆能力，并具有低毒特异的RAGE表达抑制作用及NVU保护作用，但其保护NVU的作用机制尚不明确。本课题以RAGE作为NVU调控靶点进行确证研究，以NVU功能调节作为局部整体单位，拟探讨野拔子防治AD的作用机制。通过建立RAGE高内涵筛选模型，进行其RAGE表达抑制剂再评价；通过建立RAGE高表达AD细胞模型及NVU模型，探讨其发挥神经保护及NVU保护作用的信号通路；通过建立AD动物模型，阐明其基于RAGE改善NVU结构功能的分子机制。为研究RAGE病理信号作用提供有效方法，为开发防治AD新药提供新的理论依据和技术手段。

阿尔茨海默病（AD）是严重危害人类健康的神经退行性疾病，发病机制复杂，缺乏有效防治药物。课题组在前期研究工作中，发现AD与神经血管单元（NVU）的功能改变密切相关，以及晚期糖基化终末产物受体（RAGE）广泛参与AD的NVU损伤机制，还发现中药野拔子有效活性成分具有低毒、特异的RAGE表达抑制作用及NVU保护作用。本课题以RAGE作为NVU调控靶点进行确证研究，拟探讨野拔子有效活性成分防治AD的作用机制。根据研究计划，主要完成了以下研究内容：.（1）在已有RAGE真核表达载体及高内涵筛选模型的基础上，进一步优化RAGE抑制剂高内涵筛选模型，并对野拔子有效活性成分进行再评价，通过初筛和复筛，确定了3个低毒、特异的目标化合物，其IC50分别为10.98 μM、7.12 μM、6.46 μM；.（2）建立RAGE高表达的AD细胞模型，结合免疫细胞化学技术、实时荧光定量PCR、ELISA等技术，探索性地观察了RAGE在AD细胞中介导的病理信号通路，系统评价了野拔子有效活性成分的神经保护作用及作用机制，证明野拔子有效活性成分通过干扰RAGE及其信号通路发挥神经保护作用；.（3）建立体外AD神经血管单元模型，结合高内涵成像技术、免疫细胞化学技术等技术，探讨了RAGE在AD细胞中介导的病理信号通路，评价了野拔子有效活性成分的药理作用及作用机制，证明其可通过提高TEER和BBB特征性酶含量而提高屏障功能；通过减少条件培养液粘附分子释放、提高神经营养因子含量而改善神经微环境，从而对NVU发挥保护作用；.（4）采用APP/PS1双转基因AD小鼠模型，探讨了RAGE在AD中介导的NVU耦联的病理信号作用，评价了野拔子有效活性成分的作用机制，证明口服野拔子中有效提取物J20724、J20725可显著提高AD小鼠的学习记忆能力，J20724、J20725通过维持NVU主要结构的完整性，改善局部微循环灌流量，提高神经功能，调节细胞内信号转导而发挥脑保护作用。其主要作用靶点可能是RAGE。.（5）发表国际研究性论文7篇，SCI收录6篇；参与国内学术会议2次，国际学术会议1次；协助培养博士研究生2名、硕士研究生1名。