应用细胞内免疫抗乙肝病毒的基因治疗研究

应用兼并引物PCR技术和噬菌体展示技术，分别从鼠源笥抗HBcAg杂交瘤细胞株和乙肝病毒感染者周围血单核淋巴细胞中克隆了鼠源性抗HBcAg单链抗体基因、人源性抗HBsAgFab段和HBcAg单链抗体基因，经DNA序列分析和原核表达鉴定后，重组至逆转录病毒载体PLNSX和PLNCX。以人肝癌细胞7721，HepG2和PLC/PRF/5为靶细胞，进行基因共转染舜时表达和经PA317细胞包装后基因转导，应用HBV进行病毒攻击实验，经检则实验组上清中HBsAg和HBcAg，结果显示鼠源性HBcAg单链抗体细胞内表达抑制HBV复制效率为56%，人源性HBsAg Fab段抑制效率为45%，人源性HBcAg单链抗体抑制效率为61%。实验结果表明，应用细胞内免疫HBV的基因治疗具有潜在的应用价值。同时建立了以逆转录取病毒为载体基因治疗的稳定性好、敏感性高的生物安全检测系统。