从miR-29靶向TGF-β/Smads信号通路探讨扶正化瘀方抗心肌纤维化作用的机制研究

MiR-29 is a potential therapeutic target and inhibitor of TGF-β/Smads signal pathway in fibrotic disease. Previous studies have shown that, Fuzhenghuayu Formula play a role of prevention myocardial fibrosis after myocardial infarction. It could improve cardiac function; inhibit the expression of myocardial collagen. Based on these, we proposed hypotheses that Fuzhenghuayu Formula can regulate extra cellular matrix by miR-29 targeted TGF-β/Smads to against myocardial fibrosis. The project will observe the effects of Fuzhenghuayu Formula on TGF/smads pathway, cardiac fibroblast proliferation and collagen synthesis under the condition of cytokines (AngII, ALDO) stimulation, miR-29 over expression and inhibition by using liposomal transfection, RNA interference, plasmids construction, make adenovirus, reporter gene test, etc. Hope it can provide experimental evidence for "treating different diseases with same method" of Traditional Chinese Medicine, and and provide new ideas for molecular regulation of tissue specificity.

miR-29是TGF-β/Smads纤维化的下游抑制剂和纤维化疾病的潜在治疗靶点。前期研究表明，扶正化瘀方具有改善心功能，抑制心肌胶原表达，在一定程度上防治心梗后心肌纤维化的作用。据此，我们提出扶正化瘀方具有通过miR-29靶向TGFβ/Smads信号通路调控细胞外基质抗心肌纤维化的假说，通过复制大鼠急性心梗模型、提取心肌成纤维细胞，采用脂质体转染、基因干扰、质粒构建、腺病毒包装、报告基因测活等方法，观察细胞因子（AngII、ALDO）刺激、miR-29下调和上调情况下，对TGF/smads通路以及心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的调控，从整体和细胞分子水平揭示miR-29在心肌纤维化发生发展中的作用，以及扶正化瘀方的干预机制。以期为中医学"异病同治"的治疗原则提供实验依据，为分子调控组织特异性研究提供思路。

miR-29是TGF-β/Smads纤维化的下游抑制剂和纤维化疾病的潜在治疗靶点。前期研究表明，扶正化瘀方具有改善心功能，抑制心肌胶原表达，在一定程度上防治心梗后心肌纤维化的作用。据此，我们提出扶正化瘀方具有通过miR-29靶向TGF-β/Smads信号通路调控细胞外基质抗心肌纤维化的假说，通过复制大鼠急性心梗模型、提取心肌成纤维细胞、转染miR-29 mimics致miR-29过表达以及转染miR-29 inhibitor致miR-29表达受抑CFs模型，观察细胞因子AngII刺激、miR-29上调和下调情况下，对TGF-β/Smads通路以及心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的调控，从整体和细胞分子水平揭示miR-29在心肌纤维化发生发展中的作用，以及扶正化瘀方的干预机制。研究结果显示，扶正化瘀方可改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化程度，促进梗死边缘区心肌组织miR-29表达，直接或间接增加对TGF-β/Smads信号通路的抑制作用，下调TGF-β1、Smad3、Smad4及其mRNA的表达，上调Smad7表达水平，降低I型胶原、III型胶原、MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2等细胞外基质的表达。进一步离体实验结果表明，miR-29过表达可明显抑制CFs增殖，而转染miR-29 inhibitor致细胞miR-29表达受抑则明显促进CFs增殖；扶正化瘀方对AngII刺激的CFs具有显著的保护作用，可抑制CFs增殖，促进其凋亡，作用机制可能与其上调miR-29表达水平，抑制TGF-β/Smads信号通路及MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2等细胞外基质相关蛋白的表达有关。本项目以心肌纤维化特异性microRNA---miR-29为切入点，为心肌梗死后心肌纤维化的治疗提供了新的干预靶点，从调控心肌纤维化的新靶点---miRNA角度，阐明扶正化瘀胶囊抗心肌纤维化的作用机制，为中医药治疗心肌纤维化及中医学异病同治的治疗原则提供了理论基础及研究思路。