基于microRNA调控VEGF信号通路的活血益气方促血管新生作用的研究

MicroRNA (miRNA) plays an important regulatory role in angiogenesis; vascular endothelial growth factor (VEGF) signal pathway may be the main way of miRNA affects the blood vessels. Previous studies have shown that Qi Supplement and Blood Activation prescription (QSBA) and its decomposed recipe can induce the expression of VEGF and its mRNA, raised the VEGF signal pathway in myocardial ischemia local. Based on these, we proposed hypotheses that QSBA has the function of regulating miRNA to raise VEGF signal pathway mediated angiogenesis. Take the endothelial specificity miR-126 as the breakthrough point, the project will observe the effects of QSBA and its decomposed recipe on the expression of miR-126, the proliferation, apoptosis, colony formation, migration, tube forming ability of HUVECs, and VEGF signal pathway by copying acute myocardial infarction rat model, hypoxia HUVECs model, miR-126 over expression HUVECs model with pcDNA3/pri-miR-126 transfected, miR-126 expression was inhibited HUVECs model with PGCSIL-GFP/miR-126 transfected. All of these will further reveal the gene regulates mechanism of angiogenesis, the intervention effects and prescription combination rules of QSBA, provide the experimental basis for the Chinese medicine treatment of ischemic heart disease.

微小RNA（miRNA）在血管生成过程起着重要的调节作用，血管内皮生长因子（VEGF）信号通路可能是miRNA影响血管发生的主要途径。前期研究表明，活血益气方及其拆方具有诱导缺血心肌局部VEGF及其mRNA表达，上调VEGF信号通路的作用。据此，我们提出活血益气方具有通过miRNA调控VEGF信号通路介导血管新生的假说，并以血管内皮特异性miR-126为切入点，通过复制大鼠急性心梗模型、HUVECs缺氧模型、转染pcDNA3/pri-miR-126致miR-126过表达以及转染PGCSIL-GFP/miR-126致miR-126表达受抑HUVECs模型，观察活血益气方及其拆方对miR-126表达，HUVECs增殖、凋亡、集落形成、迁移、管状形成能力及VEGF信号通路的影响，以期进一步揭示血管新生的基因调控机制及活血益气方的干预作用与配伍规律，为中医药治疗缺血性心脏病提供实验依据。

微小RNA（miRNA）在血管生成过程起着重要的调节作用，血管内皮生长因子（VEGF）信号通路可能是miRNA影响血管发生的主要途径。前期研究表明，活血益气方及其拆方具有诱导缺血心肌局部VEGF及其mRNA表达，上调VEGF信号通路的作用。据此，我们提出活血益气方具有通过miRNA调控VEGF信号通路介导血管新生的假说，并以血管内皮特异性miR-126为切入点，通过复制大鼠急性心梗模型、HUVECs缺氧模型、转染miR-126 mimics致miR-126过表达以及转染miR-126 inhibitor致miR-126表达受抑HUVECs模型，观察活血益气方及其拆方对miR-126表达，HUVECs增殖、凋亡、集落形成、迁移、管状形成能力及VEGF信号通路的影响，以期进一步揭示血管新生的基因调控机制及活血益气方的干预作用与配伍规律，为中医药治疗缺血性心脏病提供实验依据。研究结果显示，活血益气方可促进心肌梗死后大鼠梗死边缘区心肌组织血管新生，下调miR-126及Spred1的表达，直接或间接减轻miR-126对VEGF的负性调控作用，上调VEGF及其mRNA表达。活血益气方组药理作用显著优于其拆方各组，活血方和益气方起协同配伍作用。进一步离体实验结果表明，miR-126过表达可显著抑制HUVEC增殖、迁移，而转染miR-126 inhibitor致细胞miR-126表达受抑则可显著增加HUVEC增殖、迁移；活血益气方及其拆方药物血清对缺氧后HUVEC具有显著的保护作用，可促进HUVEC增殖，抑制其凋亡，同时促进HUVEC迁移，作用机制可能与其下调miR-126，增强细胞抗氧化能力和调控VEGF/KDR下游信号联级通路有关，包括介导增殖的PKC/Ras/Raf-1信号通路以及介导迁移的FAK，p38/MAPKAPK/HSP27信号通路。