针刺对杏仁核介导的痛感觉成份和情感成份影响机制研究

The Amygdala is an important structure of the central nervous system involving acupuncture analgesia. The present study is designed to study the effect of electroacupuncture of Zusanli (ST36)-Yanglingquan (GB34) on the sensory and emotional components of pain and their related substance basis in chronic compressive injury (CCI)-induced chronic neuropathic pain rats and gene knockout mice with aversion by using ethological methods. Further, techniques of electrophysiology, electronic microscope, immunofluorescenc histochemistry, real time-PCR, western blot, ELISA , etc., will be employed to analyze concurrent changes of some excitatory and inhibitory neurotransmitter receptor subunit protein expression levels, neuronal synaptic plasticity, intracellular cAMP/PKA/MAPK/CREB, CRE-NR2B-mGluR1 signal pathway network activities after repeated electroacupuncture interventions so as to reveal the underlying mechanisms of acupuncture analgesia and to provide scientific evidence for clinical acupuncture treatment of chronic pain. In addition, it may also be helpful to answer the current hot-sopt question of simple "placebo effect" of acupuncture therapy in clinical practice.

杏仁核是针刺镇痛调控中枢的重要组成部分。本研究拟采用行为学方法，在结扎大鼠坐骨神经造成慢性神经痛、条件性厌恶情绪反应和相关基因敲除小鼠上，观察电针"足三里-阳陵泉"治疗所产生的累积性镇痛效应与动物的痛行为的感觉成分和情感成分的关系；并拟采用荧光定量-PCR、免疫印迹、免疫荧光组化、电生理学、电镜等技术，观察杏仁核内与针刺镇痛效应感觉成份、情感成分相关的兴奋性和抑制性神经递质/调质的受体蛋白/基因、细胞内cAMP/PKA/MAPK/CREB、CRE-NR2B-mGluR1信号通路网络活动的关系，以及杏仁核神经元突触可塑性变化、可塑性相关蛋白表达等变化的关系，深入探讨针刺镇痛效应的机理，为临床针刺治疗慢性痛提供科学依据，并有可能回应当前关于针灸疗效只不过是安慰剂心理效应的质疑。

疼痛不仅包括感觉成分，也包括情绪、记忆等多个维度。杏仁核是疼痛和情感调控的重要中枢。本研究在结扎坐骨神经造成慢性压迫性神经损伤（CCI）及痛负性情绪(CCI+NA)大鼠模型上，以疼行为反应、杏仁核神经细胞突触可塑性变化、痛感觉和情感及突触可塑性相关受体蛋白表达为指标，采用行为学、细胞免疫化学、定量-PCR，免疫印迹（WB）、扫描电镜、杏仁核微量注射受体拮抗剂等技术，观察到：电针足三里-阳陵泉可明显改善慢性神经痛的感觉成分和情绪成分。杏仁核阿片μ受体(MOR)参与了电针缓解疼痛感觉成分，而AMPA-GluA1受体参与了电针改善疼痛情感成分。电针改善痛感觉成分还可能与其抑制CCI大鼠杏仁核促皮质激素受体CRF1、CRF2、谷氨酸 NMDA受体亚型NR-2A, NR-2B基因、细胞内ERK2、CREB蛋白表达的增加，以及抑制CCI+NA大鼠CRF1R、CRF2R、NMDA-NR1、-NR-2A、-NR-2B基因、mGluR1 基因及蛋白、GABA-AR、GABA-C基因表达的减低有关。而电针改善痛情绪成分的效应可能与其减弱了电针上调GluA1蛋白、mGluR1 基因及蛋白、GABAB2蛋白、及Piccolo基因表达的效应有关。此外，电针还可改善慢性神经痛负性情绪大鼠杏仁核突触可塑性变化（如：突触间隙增宽, 突触前活性带的长度、突出后致密度(PSD)厚度及突出界面的曲率的减低），明显抑制突触相关蛋白突触前Piccolo基因、突触素蛋白表达的下调和突触后PSD-95基因表达的上调。这些结果揭示了电针足三里-阳陵泉改善慢性神经痛作用的新靶点，从整体行为学反应、杏仁核局部神经细胞突触结构及其细胞膜受体、膜内、外相关蛋白、基因的表达阐明了电针缓解神经病理性疼痛的机制和科学内涵，为临床针刺缓解慢性神经痛提供了详实的实验证据。