整合素αⅡb亚基介导信号在血小板活化和血栓形成中的作用

整合素αIIbβ3可以介导双向信号即内向外信号和外向内信号参与血小板活化和血栓止血。我们通过研究一例变异血小板无力症病患（其β3亚基R724截短突变导致β3胞内主要功能区缺失）的血小板功能，发现该病人血小板经anti-LIBS抗体刺激，其整合素αIIb亚基能够单独介导外向内信号活化血小板；该信号还能够促进凝血酶所引起的正常人血小板活化；并进而发现β3亚基R724-R734功能区能够阻断该活化信号通路。通过利用激酶抑制剂和蛋白质组学技术，我们还进一步确定了αIIb介导血小板活化过程中的一些关键调控信号分子。围绕这些发现，本课题将结合小鼠模型，深入研究αIIb介导信号在血小板活化中的广泛作用及信号转导机制，以及β3R724-R734区阻断作用的本质，阐明αIIb介导信号在血栓形成中的作用。由于临床使用αIIbβ3受体拮抗药物往往会造成严重出血，本项目的研究结果有助于开发较为温和的新型抗栓药物。

本项目围绕血小板整合素受体αIIbβ3介导的outside-in和inside-out信号调控机制展开研究，发现一例血小板无力症（β3亚基R724截短突变）病人血小板经anti-LIBS抗体刺激后，其整合素αIIb亚基能够介导outside-in 信号激活PI3K/Akt通路活化血小板；该信号还能够对凝血酶引起的正常人血小板活化起到放大作用，发现β3 R724-R734穿膜多肽能够抑制凝血酶引起的血小板聚集。基于β3亚基R724-R734区阻断作用的新机制药物由于只阻断αIIb介导血小板活化，因而可能有助于发展处一类具有较低的出血副作用药物。.我们还对αIIbβ3下游PI3K/Akt 通路中重要信号分子PDK1在血小板活化中的作用机制开展研究，通过构建血小板特异PDK1缺失小鼠，发现PDK1缺失抑制低浓度凝血酶引起的血小板聚集以及血小板在纤维蛋白原上的铺展和栓块收缩，这提示PDK1调控血小板活化是通过整合素αIIbβ3介导outside-in信号发挥作用。机制研究发现PDK1缺失抑制血小板Akt T308磷酸化及其下游Gsk3β S9磷酸化，但对Akt S473磷酸化没有影响；而mTORC2抑制剂PP242能够抑制血小板Akt S473磷酸化，但对血小板活化以及Akt T308和Gsk3β S9磷酸化没有影响，该项研究成果首次阐述了PDK1-Akt T308-Gsk3β信号轴在血小板活化中的重要作用。.我们还发现成对免疫球蛋白样受体B（PIRB）高表达于血小板。通过对PIRB胞内结构域缺失（PIRB-TM）小鼠血小板功能分析发现，PIRB-TM血小板聚集、铺展以及栓块收缩能力都明显提高；还发现PIRB能够与磷酸酶SHP1和SHP2结合，降低LAT、SLP76、PLCγ2、FAK和整合素αIIbβ3的β3亚基Y785磷酸化水平，发挥抗血小板活化能力；还发现PIRB配体血管生成素样蛋白-2（ANGPTL2）在血小板中高表达并储存于α-颗粒中，纯化的ANGPTL2能够抑制血小板聚集和铺展，由此揭示出ANGPTL2/PIRB在血小板活化自控中的关键作用。.在本项目基金资助下，围绕整合素αIIbβ3的双向信号调控机制在血液学期刊Blood上发表研究论文3篇，培养博士后一人，博士研究生3人。在多个国际大会作会议报告并获得会议奖励。