人类新基因URP2SF参与NF-κB和凋亡的机理研究

NF-κB通路在细胞增殖、分化、凋亡及炎症过程中均发挥重要作用。本研究组通过建立高通量的双荧光素酶报告基因筛选体系，首次发现人类新基因URP2SF可以明显抑制NF-κB通路的转录活性。该基因编码663个氨基酸，含有FERM 和PH结构域。Northern blot和RT-PCR结果显示URP2SF主要表达于免疫系统中。过表达结果表明URP2SF定位于全细胞，在抑制NF-κB通路的同时，URP2SF还能够诱导细胞凋亡。更重要的是，针对URP2SF的有效siRNA能够激活NF-κB通路，并且抑制TNF-α诱导的细胞凋亡过程，这提示URP2SF可能作为NF-κB通路的转录抑制子来调节细胞凋亡过程。本课题将进一步深入研究URP2SF的结构和功能，探讨其参与NF-κB信号通路及细胞凋亡的途径和分子机制，为URP2SF潜在的抗肿瘤的临床应用奠定基础。

本研究组通过已建立高通量高内涵的双荧光素酶报告基因筛选体系，首次发现明显抑制NF-κB通路转录活性的新基因URP2SF，抑制AP-1通路活性的新基因CGREF1，以及诱导细胞死亡的新基因TMEM161A。. 人类新基因URP2SF含有FERM和PH结构域，Northern blot和RT-PCR结果显示URP2SF主要表达于免疫系统中。过表达结果表明URP2SF定位于全细胞，其在抑制NF-κB通路的同时，还能够诱导细胞凋亡，同时引起线粒体膜电位下降。此外，URP2SF的有效siRNA能够激活NF-κB通路，并且抑制TNF-α诱导的细胞凋亡过程。在各通路筛选结果显示，URP2SF还能明显抑制CRE活性，激活p53、IFNβ通路，进一步研究将为URP2SF潜在的抗肿瘤临床应用奠定基础。. CGREF1（cell growth regulator with EF-hand domain 1）是一个能够抑制AP-1活性的人类新基因，并确认其为通过内质网-高尔基体这一经典途径分泌的蛋白。过表达CGREF1能够抑制MAPK蛋白激酶通路中Erk及p38的磷酸化，并在293T和HCT116细胞中能够抑制细胞的增殖。RNA干扰实验显示沉默CGREF1后，对AP-1有活化作用。初步实验结果显示，CGREF1是一个分泌蛋白，并能够抑制AP-1的活性及影响细胞增殖。. 人类新基因TMEM161A含有8个潜在的跨膜区，其与pEGFP-N1共转染细胞后能引起GFP荧光面积减小、转染后CCK8值减小，克隆形成实验克隆数较少，证明TEME161A具有抑制细胞增殖的功能。此外，TMEM161A还能够引起PS外翻及线粒体膜电位下降以及DAPI染色细胞核形态改变，说明TMEM161A能够诱导细胞凋亡，而且TMEM161A引起的凋亡依赖于caspase途径。TMEM161A在AP-1和NF-κB通路的激活作用，为进一步研究其分子机制提供了线索。. 本课题在国际上首次发现了三个与细胞存活相关的人类新基因，并对其发挥作用的信号通路和特性进行了探索，进一步研究将有助于阐明蛋白质降解发生的分子机理并有可能寻找到相关疾病特别是恶性肿瘤的新的治疗靶点。