利用基因置换研究HCV NS5A蛋白在病毒复制和感染中的作用

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白5A（NS5A）为多功能的高度磷酸化蛋白，在病毒复制和调节宿主细胞应答中起重要作用。缺乏高效复制的细胞模型困扰HCV研究已久，而JFH1(2a)不需筛选压力和适应性突变即能在体外培养细胞中高效复制并产生感染性病毒颗粒。本项目拟建立JFH1和HC-J4（1b）细胞模型，通过基因置换将JFH1与HC-J4或HGV的NS5A基因进行重组，分析JFH1 NS5A对自身及HC-J4复制和感染性病毒颗粒产生的影响；检测基因置换对NS5A磷酸化形式和分布的改变、磷酸化蛋白对NS5A与蛋白和HCV RNA结合能力的影响，鉴定影响NS5A磷酸化的激酶和作用位点、NS5A与RNA的结合位点，探讨JFH1 NS5A在病毒复制中的作用。由于特定基因置换不改变病毒基因组的整体结构，故可作为研究单一蛋白功能的有效方法，为研究HCV各蛋白在病毒复制周期的功能和与细胞的相互作用奠定了基础。