应激态骨髓瘤细胞来源微泡富集并横向传递ZNF224蛋白促进血管新生

It is known that tumor angiogenesis plays a key role in diease progression of malignant tumor, especially for the resistence of anti tumor therapy in cellular stress conditions. Our previous work showed Multiple Myeloma(MM) cells shed microvesicles(MVs) with particularly high expression of ZNF224 protein when they are confronted with serum deprivation(SD), and these MVs significantly increased the microtube formation of endothelial cells. We proposed that myeloma cells facilitate tumor angiogenesis by horizontal transfer of enriched ZNF224 protein in MVs under cellular stress conditions.. In this project we will evaluate the horizontal transfer of ZNF224 protein in myeloma cells derived MVs under cellular stress conditions, and determin their angiogenesis capacities in vivo and in vitro. Then we will clarify the specific mechanism that ZNF224 protein regulates NF-κB pathway in endothelial cells. Further more, we will explore the relevance of myeloma cell-derived MVs and ZNF224 expression to tumor angiogenesis as well as diease progression. Our project is supposed to improve present understanding of oncogenetic roles of myeloma cell-derived MVs，especially their angiogenesis capacities in cellular stress conditions, and open new doors of clinical strategy for resistence of anti MM therapy.

血管新生是恶性肿瘤发生发展的重要特征，尤其在应激态下其与肿瘤治疗抵抗密切相关。我们前期研究发现，多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞在血清剥夺（serum deprivation,SD）应激态下释放富含ZNF224蛋白的微泡（microvesicles,MVs），后者显著促进内皮细胞小管形成。我们推测MM来源MVs通过富集并横向传递ZNF224蛋白促进应激状态下肿瘤血管新生。.本课题将通过体内外实验研究MVs介导的ZNF224蛋白横向传递对应激状态下肿瘤血管新生的促进作用，阐明 ZNF224对内皮细胞NF-κB活性的影响及调控机制，并在小鼠模型和临床资料中明确癌性囊泡和ZNF224蛋白的异常表达与MM血管新生和疾病进展的关系。此项目的完成将揭示癌性囊泡在应激状态下肿瘤血管新生调控中的重要机制，为MM的治疗抵抗提供新的临床策略。

血管新生是多发性骨髓瘤发生发展的重要环节，尤其与应激状态下的肿瘤治疗抵抗密切相关。本课题从体外实验、小鼠动物模型及临床患者标本检测方面研究了多发性骨髓瘤细胞来源微泡在肿瘤血管新生中的重要作用。. 给MM细胞株以血清饥饿或不同浓度药物应激刺激，硼替佐米和来那度胺药物处理的MVs内血管新生因子水平均显著低于对照组。硼替佐米、来那度胺药物处理组的MVs抑制内皮细胞迁移、侵袭和小管形成。并下调内皮细胞中NF-κB信号通路活性。揭示了硼替佐米、来那度胺在抑制多发性骨髓瘤血管新生方面的新机制，为肿瘤抗血管新生治疗提供了新的思路。. 我们在NOD/SCID小鼠构建MM移植瘤。用PKH26荧光染料标记尾静脉注射的骨髓瘤MVs，结果显示MM-MVs选择性定位于移植瘤组织。实验组小鼠的肿瘤增殖速度明显高于对照组，免疫荧光法检测移植瘤组织中CD31的表达，结果实验组移植瘤的肿瘤血管新生显著增强。进一步研究显示，实验组移植瘤组织内NF-κB-pp65的表达较对照组显著升高。因此尾静脉注射的骨髓瘤细胞来源的MVs选择性地滞留于肿瘤组织，通过激活NF-κB信号通路促进肿瘤血管新生，进而促进肿瘤生长。. 多发性骨髓瘤患者外周血及骨髓血中MVs总数量明显高于正常对照组，且复发患者与初治患者相比MVs数量更多。其中CD38+CD138+-MVs比例与β2微球蛋白、LDH呈正相关。内皮细胞来源微泡及血小板来源微泡的比例在多发性骨髓瘤患者外周血和骨髓中显著升高，提示内皮细胞和血小板的活化可能在多发性骨髓瘤疾病发生、发展中具有重要意义。应用流式细胞术，通过对MVs表面抗原检测，我们可以在MM循环外周血及骨髓血中检测到MM特异性的MVs，这些循环MVs与MM疾病状态相关，有望成为MM新型生物标记物用于临床辅助诊断及预后判断。