MCL1的谷胱甘肽修饰对胆囊癌细胞化疗敏感性的影响及其机制

胆囊癌对化疗不敏感。除药泵蛋白外，还存在其它尚未阐明的机制。在胆囊癌SGC996细胞中，我们发现细胞内活性氧（ROS）水平低,同时存在具有肿瘤干细胞特性的SP细胞，其ROS水平更低，因此胆囊癌SP细胞比非SP细胞具有更强的细胞活力和耐药性；而升高胆囊癌细胞内活性氧能下调还原型谷胱甘肽（GSH）水平，提高胆囊癌细胞的化疗敏感性。文献报道GSH能修饰髓样细胞白血病蛋白-1（MCL1）,使其保持稳定。MCL1是抗凋亡蛋白，其失活将促使肿瘤细胞凋亡。为此我们首次提出在胆囊癌SP与非SP细胞中存在ROS↓→GSH↑→MCL1的谷胱甘肽修饰↑→胆囊癌细胞耐药的机制，重点研究GSH对MCL1的修饰机制，进而阐明SP细胞中MCL1的谷胱甘肽修饰更强是SP细胞更具耐药性的原因，为活性氧生成剂和GSH清除剂提高胆囊癌疗效提供理论依据。

胆囊癌是胆道系统最常见恶性肿瘤，早期诊断困难，根治切除率低预后差。化疗是其最常用的辅助治疗手段，但耐药是影响胆囊癌化疗疗效的重要原因，因此研究胆囊癌的耐药机制及干预相关环节提高化疗药物疗效具有重要意义。本研究通过胆囊癌细胞系、侧群细胞（SP细胞）、裸鼠移植瘤、人胆囊癌标本四个层面，探究胆囊癌细胞内髓样细胞白血病蛋白-1（Mcl-1）的表达和谷胱甘肽修饰水平，及其在胆囊癌化疗耐药中的作用,进而阐明SP细胞更具耐药性的机制。结论如下。.1.Mcl-1是胆囊癌顺铂（CDDP）耐药的重要原因之一，沉默Mcl-1会增加CDDP杀伤作用。.2.Mcl-1在人胆囊癌组织中高表达，Mcl-1高表达的胆囊癌患者生存期较低表达者短。.3.PEITC在胆囊癌细胞和动物试验中能增强CDDP杀伤作用，无明显毒副作用。PEITC通过降低细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和还原型谷胱甘肽/氧化性谷胱甘肽(GSH/GSSG)比例，增加Mcl-1的谷胱甘肽修饰水平，导致Mcl-1蛋白不稳定，被泛素蛋白酶体系统快速降解，从而加强CDDP化疗杀伤作用。.4.Cys16、Cys286均是人Mcl-1的谷胱甘肽修饰位点。修饰位点的突变，会导致Mcl-1更稳定，不易被泛素蛋白酶体系统降解，胆囊癌细胞更耐药。.5.SP细胞Mcl-1表达量明显高于非SP细胞，是其更具耐药性的原因。PEITC与CDDP联合用药可显著降低SP细胞中Mcl-1表达量，增加杀伤作用。. 通过进一步研究胆囊癌耐药机制，阐明了胆囊癌中高表达的Mcl-1是耐药的重要原因。通过影响细胞内氧化还原状态，增加Mcl-1谷胱甘肽修饰可导致该蛋白迅速降解，增加化疗药物疗效，为活性氧生成剂和GSH清除剂提高胆囊癌化疗疗效提供理论依据。