载基因VEGF165超声微泡造影剂治疗肺动脉高压动物模型的实验研究

This study containing perfluoropropane, self-made lipid parcel of ultrasound microbubble contrast agents for the media, glutaraldehyde cross-linking prepared by adhesion of vascular endothelial growth factor gene of VEGF165 to carry genes of ultrasound through experiment on pulmonary hypertension rabbit model with left-right shunt congenital heart disease whose artery and pulmonary artery are connected by artificial catheter,and transmis the therapy gene by liposome microbubble targeting to pulmonary hypertension animal models,to observe the improved conditions of pulmonary artery pressure、right ventricular hypertrophy index and the rate of gene transfer of VEGF165 and its expression, to explore the feasibility through the lipid containing halothane gas microbubbles in the lung tissue levels of ultrasound-mediated microbubble cavitation targeted delivery to the delivery of radiolabeled macromolecules and the condition of liposome microbubbles by micro-bubble cavitation promote endothelial cell gene transfection at the cellular level;to provide practical experience for in-depth study of targeted delivery system for ultrasound-mediated micro-bubble and gene therapy of pulmonary hypertension.

-本研究拟以自制含全氟丙烷的脂质包裹超声微泡造影剂为介质，以戊二醛交联法制备黏附血管内皮生长因子基因VEGF165的携带基因超声微泡，对通过人工置管连接主动脉与肺动脉的左向右分流性心脏病肺动脉高压的动物兔模型进行实验，以脂质体微泡靶向肺动脉高压动物模型传输治疗基因，观察其肺动脉压力、右心室肥厚指数等结果的改善情况及VEGF165基因转染率和表达情况，探讨通过脂质含氟烷气体微泡在动物肺组织水平以超声介导、微泡空化靶向传输投送放射性核素标记大分子物质的可行性，以及脂质体微泡在细胞水平通过微泡空化促内皮细胞基因转染的条件;为超声介导微泡空化靶向传输系统的深入研究及肺动脉高压的基因治疗提供实践经验

肺动脉高压的发病机制近年来得到了不断深入的研究，以及在发病不同途径新药物的临床应用,给其治疗开辟了广阔的前景。但这些药物和新的治疗方法在临床上应用时间较短，基因治疗则多数停留在实验阶段，且基因治疗则多以腺病毒为载体，普遍存在基因转移载体进入人体后的安全性问题即载体进入体内后,容易引起炎症或免疫性反应,特别是激活体内的原癌基因或抑癌基因,从而引发细胞的恶性变。而超声造影微泡的出现为药物和基因的携带提供了新的尝试。动物体内研究已证实超声造影剂微泡可作为基因的载体，已知超声照射下,微泡造影剂能短暂增加细胞膜通透性,或促进吞噬等作用,而使药物或基因进入胞内, 且超声造影微泡做为载体易于构建与操纵,并能容纳大量的外原基因,能大量制备生产,价格低廉，可在指定位置给予击破释放，到达定向给药的目的。目前国内外均无应用超声造影微泡做为载体携带药物和基因对肺动脉高压进行治疗的相关研究。本研究通过购买DPPC，PEG2000，胆固醇按质量比5:2:2，旋转蒸发仪法成功制备了带正电荷的微泡造影剂，之后购买了兔源的VEGF165基因质粒，并通过荧光染色后把基因连接在脂质体微泡上，结果通过流式细胞仪、共聚焦和荧光显微镜等观察后发现兔源的VEGF165基因质粒可以成功连接在脂质体微泡上，连靶率较高。通过电荷吸附法连接微泡和基因，最终成功制备携带VEGF165的微泡造影剂。之后通过颈内静脉与颈总动静脉吻合的方法成功建立左向右分流心脏病肺动脉高压兔模型。并制备凝胶模型后通过肺高压阳离子微泡携带VEGF-LIFU辐射击破微泡释放基因量，靶向肺动脉高压兔模型传输治疗基因，为超声介导微泡空化靶向传输系统的深入研究及肺动脉高压的基因治疗提供实践经验，具有很高的医疗价值和社会价值。