14-3-3β在胶质瘤干细胞中的作用及机制研究

多种肿瘤中发现的具干细胞特性的肿瘤干细胞，因其强大的肿瘤再生能力和对放疗、化疗的抵抗性，被视为恶性肿瘤的根源和潜在的治疗靶点。然而胶质瘤干细胞受哪些分子调控？其调控机制如何？报道较少，已知14-3-3β广泛参与多种肿瘤的增殖和凋亡的调控。本课题组的前期研究也发现14-3-3β在胶质瘤中特异性高表达，抑制其表达能诱导胶质瘤细胞的凋亡。14-3-3β与胶质瘤干细胞的鉴定分子CD133在胶质瘤组织有共定位现象，并在胶质瘤干细胞中呈高表达。本研究拟在以往工作的基础上，以胶质瘤干细胞为对象，分析14-3-3β在神经胶质瘤干细胞中的表达，系统探讨14-3-3β对胶质瘤干细胞的产生、维持、增殖和分化等细胞行为的影响，进而深入研究14-3-3β影响胶质瘤干细胞的可能分子机制。这些研究对深入理解胶质瘤干细胞的分子机制，以及建立以14-3-3β为靶点的胶质瘤干细胞干预措施，具有重要的理论意义和社会价值。

神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，患者中位生存期短、生存质量差。胶质瘤干细胞是决定胶质瘤发生、发展、转移等进程的关键因素，但其调控机制如何，仍未见相关报道。本研究以胶质瘤干细胞为对象，分析14-3-3β在神经胶质瘤干细胞中的表达，观察14-3-3β对胶质瘤干细胞产生、维持、增殖和分化等细胞生物学行为的影响，探讨14-3-3β影响胶质瘤干细胞的可能分子机制。我们的研究包括：(1) 选取不同病理分级的胶质瘤患者手术标本，原代培养胶质瘤干细胞，通过RT-PCR和Western blot等检测14-3-3β在胶质瘤干细胞中的表达；(2) 构建14-3-3β干涉和过表达病毒载体, 通过流式细胞仪等分析14-3-3β对胶质瘤干细胞增殖、分化、凋亡，成瘤性等生物学行为的影响；(3) 通过miRNA生物学筛选等分子生物学试验，分析14-3-3β上游信号调控分子和下游信号通路，探讨14-3-3β影响胶质瘤干细胞的分子机制。.研究结果表明：(1) 14-3-3β与胶质干细胞标志物CD133在胶质瘤组织中有共定位现象，胶质瘤干细胞中高表达14-3-3β分子；(2) 14-3-3β可以显著影响胶质瘤干细胞的生物学行为，干涉14-3-3β能够降低胶质瘤干细胞增殖程度，诱导细胞凋亡发生，增加胶质瘤干细胞G1期数量，提高胶质瘤干细胞对化疗和放疗敏感性 (p <0.01)；(3)抑癌分子miR-128在胶质瘤中的下调可能是导致14-3-3β在肿瘤中上调的重要转录后调节机制; 干涉14-3-3β可以提高胶质瘤干细胞中PTEN, p53, p21, p16, p27, Rb1等蛋白表达,降低SKP2和BMK1表达，增加caspase-3, caspase-8和caspase-9活性；过表达14-3-3β能够增加SKP2和BMK1的表达，降低胶质瘤干细胞中caspase-3, caspase-8和caspase-9活性。我们的研究明确14-3-3β能够影响胶质瘤干细胞的生物学行为，并阐明其可能的分子机制，有望为胶质瘤的治疗提供新型靶点。