基于差异蛋白组学的肾康灵治疗原发性肾病综合征的机制研究

目前国内外治疗小儿原发性肾病综合征（PNS）多采用泼尼松或泼尼松联合免疫抑制剂的方法，但激素和免疫抑制剂的严重毒副作用的发生率亦随之上升和加重。益肾活血中药肾康灵治疗小儿PNS是福建省名老中医王著础五十多年临床的经验方（本院制剂），临床验证疗效显著，但作用机制尚不清楚。本课题应用蛋白质组学的双向凝胶电泳（2-DE）、基质辅助激光解析电离化/飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)以及生物信息学技术分析获得肽质量指纹图谱，在蛋白质水平上定量、动态、整体地进行体内和体外研究。体内研究鉴定不同病理阶段的阿霉素肾病（AN）大鼠的尿液及肾组织的诊断性标志物及中药肾康灵治疗的靶向蛋白点，体外研究分析MAPK信号通路抑制剂阻断TGF-β诱导肾小管上皮细胞增殖前后的靶蛋白的表达，为中药作用于蛋白质靶标、提高临床疗效奠定基础，从蛋白质组学水平进一步阐明益肾活血中药肾康灵治疗小儿PNS的作用机制。

益肾活血中药肾康灵治疗小儿PNS是福建省名老中医王著础五十多年临床的经验方（本院制剂），临床验证疗效显著，但作用机制尚不清楚。本课题应用较为理想的蛋白质组学实验手段即同位素标记相对和绝对定量( iTRAQ)技术结合串联质谱的方法分析获得肽质量指纹图谱，在蛋白质水平上定量、动态、整体地进行体内和体外研究。体内研究鉴定阿霉素肾病（AN）大鼠的尿液及肾组织的诊断性标志物及中药肾康灵治疗的靶向蛋白点，体外研究分析MAPK信号通路抑制剂阻断TGF-β诱导肾小管上皮细胞增殖前后的靶蛋白的表达。基于质谱鉴定的AN大鼠尿蛋白质组学iTRAQ分析结果表明：gro、Cystatin related protein 2、afamin, isoform CRA_a可作为AN大鼠尿液的诊断标志物，afamin, isoform CRA_a、apolipoprotein A-II、Complement factor B、Vitronectin，osteopontin、Coagulation factor XII可作为肾康灵的药物治疗靶点。AN大鼠肾组织的蛋白质组学分析结果表明：Ras-related protein Rab-21可作为AN大鼠肾组织的诊断标志物，regucalcin、major urinary protein-like、epidermal fatty acid binding protein 5可作为肾康灵的药物治疗靶点。基于质谱鉴定的TGF-β诱导肾小管上皮细胞（RTEC）增殖的iTRAQ分析结果表明：Growth associated protein 43、Coenzyme A synthase, isoform CRA_b可作为TGF-β诱导RTEC增殖后特异性的标志物，肾康灵干预RTEC的靶向标志物是Tmem11 protein、sialomucin core protein 24 precursor。故认为，iTRAQ定量分析法是较为理想可靠的蛋白质分析技术，值得临床推广应用，且为中药肾康灵作用于蛋白质靶标，提高临床疗效奠定基础。