新疆特色植物中酪氨酸酶抑制剂的高分辨在线筛选研究

Tyrosinase plays very important roles in melanin biosynthesis process related to fruit and vegetable browing, pigmentation disorders of human being and the occurrences and treatment of malignant melanoma. This work aimed to develop an online screening method for Tyrosinase inhibitors and screen for high activity compounds from Xinjiang indigenous plant extracts. The evaluation of inhibitory activity on melanogenesis uses post column reactor coupled to high performance liquid chromatography. The temperature, flow rate, reaction time and solvent concentration of HPLC separation parameters which affect the evaluation of inhibitory activity need to be optimized and some known tyrosinase inhibitor such as ellagic acid and oxyresveratrol,were adopted to verify the reliability, robust and the sensitivity of developed screening model. The developed screening method were then applied for screening high inhibitory activity compounds in liquorice, safflower, Cistanche, Conioselinum vaginatum and Dogbane, develop the high resolution screening method and high sensitivity analytic methods for these compounds and large scale preparation method through high speed count current chromatography and preparative HPLC. The development of new screening method will applying to the discovery of new tyrosinase inhibitor drugs and whitening cosmetics and providing criteria for the utilization of Xinjiang native plant resources.

酪氨酸酶在黑色素的生物合成过程中起着关键性的作用，与果蔬褐化、人的色素障碍性疾病及恶性黑色素肿瘤的发生与治疗有重要关系。本项目拟建立酪氨酸酶抑制剂的在线筛选模型，并利用所建模型从新疆特色植物中寻找具有高酪氨酸酶抑制活性的化合物。拟利用高效液相色谱及流动注射衍生反应体系在线评价酪氨酸酶抑制活性，明确温度、流速、时间、浓度等因素对酪氨酸酶活性的影响，利用已被证实具有酪氨酸酶抑制活性的化合物验证模型的可靠性，并利用所构建模型从甘草、红花、肉苁蓉、新疆藁本、罗布麻等新疆特色植物提取物中发现具有高活性的酪氨酸酶抑制剂，建立此类化合物的高分辨筛选方法以及高灵敏度分析方法，利用逆流色谱、制备液相等进行活性成分的快速规模化制备，在此基础上用常规方法研究其抑制活性和抑制机理。项目建立的筛选模型将为开发新型酪氨酸酶类药物以及美白化妆品活性成分奠定技术基础,为新疆特色植物资源的开发利用提供科学依据。

酪氨酸酶在黑色素的生物合成过程中起着关键性的作用，与果蔬褐化、人的色素障碍性疾病及恶性黑色素肿瘤的发生与治疗有重要关系。利用传统方法从复杂的天然产物提取物中发现具有酪氨酸酶抑制活性的化合物是一个费时费力的过程，准确度不高且容易丢失高活性化合物。结合液相色谱的分离及酪氨酸酶活性测试反应，本研究建立了两种高效液相色谱及柱后衍生反应在线评价酪氨酸酶抑制活性的筛选模型，其中一种基于柱后的微管反应器，一种基于液滴微流控技术。确定了温度、PH值、时间、浓度、有机溶剂等对酪氨酸酶活性影响的因素。利用构建的HPLC在线筛选模型从新疆特色植物提取物中发现具有高活性的酪氨酸酶抑制剂，共研究了芳香新塔花、甘草、红花、薰衣草、白芍、桑白皮、罗布麻等新疆特色植物资源，并利用高速逆流色谱、高效制备色谱对命中的目标化合物进行精制，并利用离线方法评价了高活性单体的酶抑制活性，建立了这些化合物的剂效关系。.从芳香新塔花、甘草、红花、薰衣草、白芍、桑白皮、罗布麻等新疆特色植物中分离活性化 合物60个，其中高活性化合物8个，分别为：甘草查尔酮A、甘草素、五倍酰基葡萄糖、5-羟甲基糠醛、2-coumaric acid glucoside、七叶苷、红花色素A和5,7,2´-三羟基二氢黄酮-4´-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。.本项目研究的结果表明，采用液相色谱分离柱后在线筛选具有酶抑制活性的化合物技术路线可行，为本地特色资源深度开发提供了一个方便快捷而准确的方法，方法可以推广到其它类似体系的筛选中去。筛选得到的化合物具有良好的生物活性，且来源广泛，在原植物材料中含量较高，具有广泛的应用价值和开发前景。