miR-29b在Ang-II诱导肾小管上皮间充质转分化中的作用

AngII induces the disturbance of both the generation and the degradation of the components of extracellular matrix, which reconstitutes the tissues. Among these reconstitution, kidney tubules EMT, whose mechanism is still not clarified, is a crucial period during the whole process of renal fibrosis. miR29 Family is proved to be involved in the fibrosis of several organs. Our research group firstly find that the expression of miR29b in the renal cortex of rats which suffer from spontaneous hypertension. The experiments in vitro show that mi-29b inhibitor the development of renal tubules EMT. As far, the role of miR-29b in renal fibrosis have not been reported. So we speculate that miR-29b participates in the AngII-induced renal fibrosis. In order to test this hypothesis, we will observe the EMT in mi29b-mimic transfected cells in vitro,and invest the feasibility and mechanism of miR-29b anti-renal fibrosis. We will invest mechanism of the hypertension induced renal fibrosis from a new sight and find a new treatment target for renal fibrosis.

高血压与肾脏纤维化互为因果，形成恶性循环。AngII促使细胞外基质的生成和降解失调，使组织发生重构，其中肾小管上皮-间充质转分化（EMT）是肾脏纤维化的重要阶段，其具体机制尚未阐明。miR29家族被证明参与多个脏器的纤维化。本课题组首次发现miR-29b 在自发性高血压大鼠肾脏皮质表达显著下调，体外实验观察到mi-29b逆转AgII诱导TGF-ß1途径依赖的肾小管EMT。miR29b在肾小管EMT发生发展中的作用迄今尚无报道。因此，我们推测miR29b对的AngII诱导的肾脏纤维化具有重要调节作用，可能成为新的防治靶点。为证实这一假说，拟采用分子生物学技术，从整体-组织-细胞三个层次，观察慢病毒介导的miR29b转染细胞发生EMT情况；探索体内转染miR29b对高血压肾脏纤维化的保护作用及其机制。我们将从新的视觉研究高血压肾脏纤维化发生的分子机制，并为肾脏纤维化的防治提供新靶点。

高血压诱导的靶器官损害以上皮细胞间充质转分化和间质纤维化为特点。然而，纤维化发生的分子机制尚不清楚。非编码RNA在纤维化发生中的作用已受到广泛关注，。非编码RNA 架起了信号分子之间相互作用的桥梁。本课题在前期研究的基础上，以非编码RNA 做为研究对象，探索其在RAAS系统激活诱导的心脏及肾脏靶器官损害中的作用和分子机制，并在小鼠体内进行了microRNA-29b体内转导干预抗血管紧张素II诱导肾脏和心脏靶器官损害的研究,，在原研究计划基础上有新的发现，发现盐皮质激素受体激活诱导肾脏纤维化的分子机制。.本课题研究内容包括以下三部分：.1..做为肾素-血管紧张素-醛固酮系统的核心分子，盐皮质激素受体的激活可以在转录后水平调节非编码RNA的表达，但具体的分子机制没有阐明。本课题第一部分研究通过体外肾小管上皮细胞中研究TUG1得到以下结论：①lncRNA TUG1 和miR-29bTUG1以序列特异性方式结合，在转录后水平调节彼此表达；②首次发现敲减TUG1能够改善AngII刺激引起的促纤维化分子表达，而这一作用可以通过抑制miR-29b逆转，提示miR-29b介导了TUG1调节肾小管上皮间质纤维化作用，二者均是潜在肾脏纤维化调节分子；③盐皮质激素受体与TUG1以直接结合的方式在转录后水平调节其表达，提示TUG1-miR-29b可能是盐皮质激素受体激活至靶器官纤维化的“分子桥梁”。.2..已有的研究及本研究结果均提示miR-29b在多种器官纤维化中影响细胞外基质沉积。本课题采用昆虫杆状病毒系统合成重组腺相关病毒（rAAV9）做为载体，小鼠血管紧张素II持续灌注28天造模小鼠进行肾脏原位注射miR-29b转导。体内试验结果显示：rAAV9-miR-29b转导小鼠模型肾脏促纤维化因子表达、细胞外基质沉积、肾小管上皮细胞坏死及血浆肌酐水平均显著缓解。结果提示：rAAV9-miR-29b在体内具有抗AngII诱导的肾脏纤维化作用。.3..本课题采用尾静脉注射rAAV9-miR-29b转导小鼠心脏，AngII持续灌注28天后继续饲养10周制造小鼠纤维化及心脏功能受损模型，结果显示rAAV9显著提高模型小鼠心脏射血分数、左心室收缩率，显著改善心脏间质纤维化及心肌细胞凋亡。以上结果提示rAAV9介导的miR-29b体内转导可以抑制AngII诱导的心脏纤维化及心功能损害。