klotho基因调控及其在肾小管上皮细胞间充质转分化中的作用

We found in preliminary study that, the klotho gene expression may be influence renal tubular fibrosis, and Sp1 in the regulation of klotho gene expression may play a key role. Therefore, we propose that klotho gene regulate renal tubular EMT, and Sp1 regulate the klotho gene expression. In this study, we intend to take the spontaneous hypertension rat (SHR) and rat renal tubular epithelial cells (NRK-52E) as the objects, we make use of plasmids construction, cell transfection, siRNA, dual luciferase reporter gene and co-immunoprecipitation method to investigate the mechanism of the klotho gene regulation and its role in renal tubular EMT, so as to provide a new theoretical basis and strategies for clinical treatment.

本项目研究组前期研究发现klotho基因表达可能是影响肾小管间质纤维化发生发展的重要机制，而Sp1在调控klotho基因表达中可能起关键作用。因此，我们提出"klotho基因调控肾小管上皮细胞间充质转分化（EMT），Sp1调控klotho基因表达"这一假说。本项目拟大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）和自发性高血压模型鼠（SHR）为研究对象，通过质粒构建、细胞转染、小分子RNA干扰、电泳迁移率、双荧光素酶报告基因系统检测及免疫共沉淀等方法，探讨klotho基因的调控机制及其在肾小管EMT中的作用，以期为临床治疗提供新的理论依据和策略。

研究已证实klotho基因参与了慢性肾脏疾病发生发展的病理过程，其表达状况及其生物学功能特征与肾脏疾病的发病机制密切相关。本研究以大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）和自发性高血压模型鼠（SHR）为研究对象，通过质粒构建、细胞转染、小分子RNA干扰、电泳迁移率、双荧光素酶报告基因系统检测及免疫共沉淀等方法，研究klotho基因的调控机制及其在肾小管上皮细胞间充质转分化（EMT）中的作用。本项目研究发现klotho基因表达是影响肾小管EMT的重要机制，Sp1对klotho基因表达具有调控作用，但可能不经过p53激活途径，表明Sp1对klotho基因表达调控不受p53影响。研究结果为klotho延缓慢性肾脏病进展和肾功能衰退提供了理论基础，为精准治疗提供了新的靶点和思路。在本项目基金支持下已发表论文5篇（SCI 1篇），尚有实验结果陆续总结有待发表。培养研究生1名。