维生素D受体介导炎症促进肾小管上皮细胞向间充质转分化的作用研究

炎症与肾小管上皮细胞向间充质转分化（EMT）是肾间质纤维化发病机制中两个关键因素，其相互作用机制尚不明确。本申请项目前期工作表明：①.维生素D受体（VDR）表达从慢性肾病的极早期就开始下降；②.炎症因子能明显抑制VDR表达；③.维生素D能抑制炎症、EMT以及肾间质纤维化，并对炎症因子导致VDR表达下降有保护作用。由此，我们提出如下假说：炎症反应通过抑制VDR表达促进肾脏EMT；体内VDR表达下调能加重EMT及肾间质纤维化。本项目的研究内容为1).用肾小管上皮细胞（HKC）研究TNF-alpha促进TGF-beta诱导EMT作用，并明确VDR表达在该作用中的地位；2).通过VDR-/-小鼠单侧输尿管梗阻模型，探讨抑制VDR对肾脏EMT以及肾间质纤维化的影响。本项目研究成果将有助于阐明炎症和EMT之间的内在联系，明确VDR在EMT发病机制中的作用，为维生素D在慢性肾病治疗中的应用提供依据。

肾小管周围炎症和肾小管上皮细胞向间充质转分化（EMT）是肾间质纤维化发病机制中两个关键因素，然而这两者之间的相互作用机制尚不明确。本项目在前期工作的基础上提出了科研假说：炎症反应通过抑制VDR 表达促进肾脏EMT；体内VDR 表达下调能加重EMT 及肾间质纤维化。希望通过阐明炎症和EMT之间的内在联系，明确VDR 在EMT 发病机制中的作用，为维生素D 在慢性肾病治疗中的应用提供依据。在项目研究中，我们探讨了维生素D受体在联系肾小管周围炎以及EMT两个病理过程中的作用。在小鼠单侧输尿管梗阻的模型中，手术后极早期就能观察到VDR水平的降低。在体外培养的近端肾小管上皮细胞HK-2中，促炎症因子TNF-alpha以剂量和时间依赖的模式抑制VDR的表达。用TNF-alpha处理HK-2细胞使其对TGF-beta1诱导转分化的刺激更加敏感。外源性表达VDR能减弱TNF-alpha和TGF-beta1在诱导EMT方面的协同作用。此外，用siRNA的方法降低VDR的表达能模拟TNF-alpha促进EMT的作用。使用TNF-alpha处理以及下调VDR的表达都能诱导beta-catenin的表达以及它的核转移。维生素D受体的配体calcitriol可以恢复VDR的表达水平从而减轻单侧输尿管结扎小鼠模型梗阻侧肾脏纤维化的程度。即使是在纤维化发生的较晚阶段使用维生素D，与对照组比较仍然能有效地恢复VDR的表达并且减少胶原的聚集。在纤维化较晚的阶段使用维生素D还能有效降低由于单侧输尿管梗阻带来的beta-catenin表达水平的上调。这些结果提示促炎症因子TNF-alpha导致了在慢性肾病的早期VDR的表达水平的明显下调，而VDR水平的下降使小管细胞更倾向于发生上皮向间充质的转分化。我们的研究提示VDR的表达水平下降可能是将小管周围炎症与EMT联系起来的关键环节。