T细胞功能障碍在卵巢早衰发生发展中的作用

本研究拟在前期研究的基础上，从分子免疫水平对参与卵巢早衰自身免疫性损害的机制进行深入研究：从基因和蛋白质水平筛选POF相关的分子，检测不同分组人群中T细胞亚群，尤其Treg，以及不同细胞因子的分泌状况，以探讨T细胞功能状态与POF发生、发展的关系；设计合成高特异性PAD6多肽，制备单克隆抗体，用于筛选外周血活化T细胞中与PAD6相互作用的分子，探索未来POF免疫生物治疗的新靶点；利用d3x诱发的POF动物模型，回输体外诱导的Treg细胞，从免疫调节的角度探索POF治疗新策略。研究的重要意义在于：1. 发现与POF发生发展相关的分子，未来可能用于POF的早期诊断；2. 深入理解T细胞功能障碍，尤其Treg功能缺陷与卵巢早衰的关系，为从免疫调节的角度治疗POF疾病提供了新策略；3. 寻求潜在可治疗卵巢早衰的新途径。

为探索调节性T细胞（Treg）在卵巢功能下降及POF发生发展及预后中的作用，本研究通过（1）对卵巢早衰（POF）、卵巢功能减退（DOR）以及卵巢功能正常女性的外周血中淋巴细胞分类研究，发现POF与DOR组外周血中CD4+CD25+FOXp3+Treg明显减少（P＜0.01），POF中CD4+T/CD8+T比值增高（P＜0.05），DOR中CD4+T/CD8+T比值无明显变化；从POF与DOR外周血中分离的Treg的免疫抑制功能无明显降低（P＞0.05）。POF与DOR中特异性抗PAD6检出率明显高于正常人群（P＜0.05）；提取高PAD6的POF患者外周血Treg，初步发现其mRNA中FOXp3水平下降。实验证实自身免疫功能异常是POF发病原因之一，且PAD6可能与免疫性POF的发生相关，进一步分析总结尚在进行中。（2）在去胸腺（D3tx）诱发的AOD（POF）小鼠模型中，与正常新生小鼠相比，POF动物外周血中Treg细胞数量经过了明显的由升至降的过程，但是成年期POF小鼠外周血中Treg与正常小鼠无明显差别（P＞0.05），且卵巢区域淋巴结中以及腹主动脉旁淋巴结、腹股沟淋巴结中的Treg数量较外周血中明显升高（P＜0.05）。由于已证实D3tx小鼠血清可识别分子量约76KDa的小鼠PAD6，提示胸腺摘除后，机体淋巴系统的急性适应性反应及内源性Treg的存在，以及PAD6可能是激活内源性Treg的重要分子。（3）不同来源Treg回输后AOD的转归不同，其中卵巢周围淋巴结中的Treg非常重要，提示卵巢区域淋巴结的免疫状态较外周血具有更重要的意义，而针对POF类自身免疫性疾病治疗应关注自身微环境状态。（4）在AOD的治疗中，PAD6诱导的特异性Treg具有类似卵巢区域淋巴结Treg的功效，推测AgTreg可能成为POF治疗的新方法。