Treg参与调控POF卵泡发生的机制研究

In our previous researches, it has been confirmed that T lymphocyte dysfunction is closely related to the occurrence and development of premature ovarian failure(POF). CD25+ CD4+ Treg from normal mice can alleviate ovarian dysfunction induced by D3tx in POF mice. To explore its molecular mechanism，different POF animal models will be established in different genetic backgrounds of mice with different induction methods，to compare the characteristics of Hippo pathway in ovarian tissue. We also verify the effect of TGFβ and its inhibitors on Hippo pathway in ovarian tissues from different levels in vivo and in vitro，which aims to explore the molecular mechanism of activation of dormant primordial follicles. It should provide a new strategy for the treatment of POF。

本课题前期研究证实T细胞功能障碍与卵巢早衰的发生发展有密切联系，正常小鼠CD25+CD4+Treg的回输可以缓解D3tx诱导的POF小鼠的卵巢功能损害。为探索其分子机制，拟在不同遗传背景小鼠，不同诱导方法建立的免疫性POF动物模型上，比较卵巢组织中的Hippo通路动态变化的特点；并从体内外不同层面、多水平验证TGFβ及其抑制剂对卵巢组织中Hippo通路的影响，以期揭示激活休眠原始卵泡的分子机制，为POF的治疗提供新策略。

卵巢不仅是女性生育调控的中心，还是衰老最迅速的器官之一。对卵巢功能减退的研究是实现女性生育力保护的重要措施，而且有助于揭示生殖衰老的内在机制。.本课题通过建立二种不同遗传背景，不同诱导方式自身免疫性卵巢早衰动物模型；动态观察0、2、4、6周龄模型鼠外周血及卵巢区域淋巴结中CD25+CD4+Treg的功能差异；并系统验证了CD4+CD25+Treg回输后参与原始卵泡激活和生长卵泡发育的PI3K/AKT、TGF-β/SMAD以及Hippo信号通路，以及卵巢内各级卵泡构成、颗粒细胞凋亡水平等变化。.结果发现：两种分别模拟新生期和成年期免疫异常导致的POF动物模型（D3tx-POF和pZP3-POF）中，外周血中Treg细胞均呈现类似的下降模式；性成熟前卵巢组织中有更多的卵泡被激活启动进入生长周期；而性成熟期时卵巢组织中始基卵泡极少，生长周期中卵泡数目也逐渐减少。提示在D3tx-POF中原始卵泡池的过早耗竭是POF发生的分子机制。CD4+CD25+Treg细胞在二种POF模型鼠中均发挥了明确的阻断POF进程的功能，尤其在D3tx-POF中作用更明显，且存在明显的作用时间窗。在D3tx-POF模型鼠中，CD4+CD25+Treg可归巢于受损的卵巢组织局部，且与B淋巴细胞具有协同。回输后二种模型鼠卵巢组织转录组测序分析以及卵巢组织的信号通路分析均显示PI3K-AKT通路在CD4+CD25+Treg细胞改善POF进程中发挥重要作用。Treg可明显下调3-4周龄D3tx卵巢中pAKT的过度表达，使得D3tx过度的卵泡耗竭受到抑制，推测POF作用的靶点可能在p-AKT/AKT。小分子拮抗剂干扰实验提示p-AKT的磷酸化可能是自身免疫性POF的靶点。