外源性雌孕激素诱导去势TA2雌鼠乳腺癌发生相关分子机制

TA2小鼠为我国多年繁育筛选的自发性乳腺癌高发品系。前期研究工作显示TA2高自发性乳腺癌的发生与小鼠是否怀孕、孕产次数和MMTV病毒感染具有密切关系，外源性的雌孕激素联合给药10个月左右可以诱导卵巢切除的TA2小鼠自发性乳腺癌的发生，而单独的雌激素或者孕激素均不能诱导乳腺癌的发生。本研究以这一特殊品系作为疾病模型，通过收集不同妊娠次数TA2小鼠血清和乳腺组织标本，观察妊娠次数与小鼠血清中的雌孕激素水平和乳腺组织中的MMTV-LTR mRNA表达量之间的关系，探讨外源性雌孕激素联合给药诱导卵巢切除的TA2小鼠乳腺癌发生的原因，阐述外源性的雌孕激素与MMTV-LTR激素反应元件结合后促进TA2小鼠乳腺组织中的MMTV扩增后，通过Wnt/β-catenin信号通路促进TA2小鼠乳腺导管上皮细胞增殖和乳腺癌的发生相关分子机制，为防治具有MMTV同源序列的人乳腺癌的发生奠定实验基础和理论依据。

TA2小鼠为我国多年繁育筛选的自发性乳腺癌高发品系。TA2高自发性乳腺癌的发生与小鼠是否怀孕、孕产次数和小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）感染具有密切关系，MMTV 在体内的表达受到激素调控，并进而以插入突变的形式激活Wnt信号通路，促进肿瘤形成。为了进一步证实MMTV、Wnt信号通路和TA2自发性乳腺癌发生之间的关系，外源性的雌孕激素联合给药10个月左右可以诱导卵巢切除的TA2小鼠自发性乳腺癌的发生，而单独的雌激素或者孕激素均不能诱导乳腺癌的发生。该项目以TA2这一特殊品系小鼠作为疾病模型，收集不同妊娠次数TA2小鼠血清和乳腺组织标本，结果证实：经过10个月左右的连续给药，雌孕激素联合使用可诱导卵巢去势TA2小鼠自发性乳腺癌的发生，而单独的雌激素或者孕激素给药均不能诱导TA2小鼠自发性乳腺癌的发生。Real time PCR结果显示外源性雌孕激素诱导小鼠MMTV-LTR mRNA高表达，此外Wnt1，Wnt5a，Wnt5b和Wnt10在联合给药组的乳腺组织中高表达。β-catenin在TA2小鼠正常乳腺上皮细胞中表达定位于细胞膜，而在乳腺癌前病变和自发性乳腺癌组织中β-catenin表达主要定位在小鼠细胞核和细胞浆，表明β-catenin表达的亚细胞定位在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。通过比较不同β-catenin siRNA干扰效率，提示β-catenin siRNA-1512具有最强的β-catenin抑制效率，使用β-catenin siRNA-1512抑制TA2小鼠自发性乳腺癌细胞系MA-891 β-catenin表达，结果显示β-catenin被抑制后肿瘤细胞MMP-9， VEGF， cyclin D1和c-myc的表达，免疫共沉淀结果证实β-catenin在MA-891细胞核内与TCF-4共表达。将β-catenin抑制前后的MA-891接种至TA2小鼠体内，19天后在TA2小鼠皮下形成肿瘤，β-catenin未抑制组的肿瘤重量明显大于β-catenin被抑制组肿瘤重量，此外β-catenin未抑制组TA2小鼠具有明显的肝、肺转移率明显高于β-catenin被抑制组，Western blot结果证实β-catenin抑制组小鼠肿瘤组织明显低表达MMP-9， VEGF， cyclin D1和c-myc。