抑制GRP78对抗微管类肿瘤化疗药物的增敏作用的研究

抗微管类化疗药物如紫杉醇、长春新碱在临床上广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗，但肿瘤耐药是限制其疗效的关键问题。紫杉醇、长春新碱的主要作用机制是干扰微管的动态装配从而导致细胞周期阻滞和凋亡，但是否还存在其它与此相关的作用机制以及癌细胞对抗微管类化疗药物的细胞毒作用所产生的代偿性反应仍值得深入研究。鉴于内质网应激反应与肿瘤发生、发展及肿瘤耐药等相关以及微管与内质网之间的相互联系，本项目将研究以紫杉醇和长春新碱为代表的抗微管类化疗药物是否诱导乳腺癌细胞产生内质网应激反应，以及研究内质网应激反应中的重要调控蛋白GRP78的表达与乳腺癌细胞对作用于微管的化疗药物敏感性之间的关系，探索是否可通过抑制GRP78增强乳腺癌对紫杉醇的敏感性并研究其作用机制。这些研究对更丰富地了解抗微管类化疗药物的作用机理、耐药机制具有理论价值，同时也有助于设计增强紫杉醇等药物疗效的新策略。

抗微管类化疗药物常用于肿瘤治疗，但肿瘤对其的耐药性是影响其疗效的重要因素。本课题对以紫杉醇、长春新碱为代表的抗微管类化疗药物是否诱导乳腺癌细胞产生内质网应激反应，以及内质网应激反应中的重要调控蛋白GRP78 的表达与乳腺癌细胞对作用于微管的化疗药物敏感性之间的关系等进行了研究。本研究发现紫杉醇与长春新碱均诱导GRP78蛋白表达，XBP-1的剪接及eIF2的磷酸化，表明紫杉醇与长春新碱的确可诱导乳腺癌细胞产生内质网应激反应。此外，我们还发现紫杉醇与长春新碱均可诱导JNK磷酸化和CASPASE-7裂解，以及CASPASE底物PARP的裂解。采用RNA干扰抑制GRP78表达导致紫杉醇与长春新碱诱导JNK磷酸化、CASPASE-7及其底物PARP裂解增多，而且GRP78抑制剂EGCG也可导致紫杉醇与长春新碱诱导JNK磷酸化、CASPASE-7及其底物PARP裂解增多。GRP78表达受抑制后，紫杉醇、长春新碱诱导的乳腺癌细胞凋亡的确较GRP78表达未被干扰组显著增多。 EGCG 可显著增强乳腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。EGCG也抑制紫杉醇诱导GRP78 表达。抑制GRP78表达或联合EGCG 及紫杉醇的抑瘤作用较单用紫杉醇更显著。本研究表明抑制GRP78可增强抗微管类化疗药物的敏感性。