广西黑衣壮哮喘儿童相关基因的筛选及蛋白质谱差异表达的研究

In order to investigate the role of relative gene of the asthmatic children in development, pathologic change and effect of hormone of asthma in Guangxi Black-Clothes Zhuang children, molecular technology was carried out to detect the change of gene expression spectrum of PBMC from asthmatic children. The differential expression of gene spectrum between Black-Clothes Zhuang and Han nationality children suffered with asthma were detected respectively. Meanwhile, SELDI-TOF-MS was used to detect protein spectrum and their change rule in serum from asthma children at the proteomics level and further screen specific protein markers in serum，which may be used for diagnosis, prognosis and selection of individual therapeutic regimen of asthmatic in children. Additionally, discovery of specific gene markers presented in various pathological conditions will profit us to construct of asthma relative gene bank in Black-Clothes Zhuang children and draw a gene expression network about asthma. This study will provide an important resource for exploitation of diagnostic chip for asthma, as well as theoretical evidence for searching specific treatment aiming at key genes in development of asthma.

利用分子生物学技术检测广西黑衣壮儿童哮喘外周血单个核细胞（PBMC）基因表达谱的变化，观察其与汉族哮喘儿童基因表达谱的差异，探讨黑衣壮儿童哮喘基因在哮喘发生、发展、对治疗中的作用；同时，采用 SELDI-TOF-MS从蛋白质组学水平研究哮喘血清蛋白质表达谱及变化规律，筛选可用于哮喘患儿诊断、判断预后、个体化治疗的选择等血清蛋白质特异性标志物。为建立黑衣壮儿童哮喘相关基因表达数据库和绘制哮喘相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志，为本领域继续研究和开发诊断芯片提供提供重要资源，并为探讨在哮喘发生发展中起关键作用的基因予以特异性治疗提供理论依据。

哮喘的发生、发展，转归及对激素效应存在民族与地区差异，遗传因素对哮喘发展起到重要的作用，不同基因引起不同表型，并相互作用，而基因的突变、缺失、多态性及表达的差异则是导致此现象发生的根源。全面而系统深刻地认识这些基因， 对于研究哮喘的发病机制及从基因方面开展治疗具有重要意义，本项目利用我国独有无二的壮族“活化石”-黑衣壮的资源的优势，采用现代分子生物学技术检测哮喘基因型，并用基因测序技术对结果进行验证，对多个位点进行连锁分析和关联分析，筛选出哮喘相关易感基因，并与正常汉儿童比较，探讨黑衣壮、汉两民族哮喘患儿相关基因表达谱的差异。结果：1. IL-1R1 基因 rs1558641位点检测出 CC、CT、TT基因型，rs949963位点检测出AA、AG、GG 基因型，两个位点基因型、等位基因在哮喘和健康组中分布均有统计学意义（＜0.05），通过 SHSsis软件计算连锁不平衡（LD）的系数，D，=1.γ2=1。2. 哮喘组和对照组IL-13 +2044A/G 位点基因型、等位基因频率分布比较，差异有统计学意义( P＜0.05) ，哮喘组 A 等位基因频率高于对照组( P＜0.05)。3. RORA rs11071559 C> T的基因型频率分布为：哮喘组和健康儿童组显着不同（P <0.05）单倍型分析中，单体型TT（rs7164773 / rs11071559）哮喘患者与非哮喘患者之间，差异有统计学意义。4. ORMDL3基因SNPs位点rs12603332和rs4065275存在连锁不平衡关系（D'>0.8，r2>0.8），是具有明确关联性的单倍型，且单倍型CG、TA在黑衣壮正常儿童组和汉族正常儿童组、黑衣壮患病组和黑衣壮正常儿童组、黑衣壮患病组和汉族正常儿童组之间差异均无显著性（P值均>0.05）。.科学意义：1. IL-1R1 基因 SNP位点rs1558641和rs949963有完全连锁现象, rs1558641和rs949963位点多态性可能是黑衣壮儿童哮喘的易感因素;2. IL-13 + 2044A / G 位点多态性与黑衣壮儿童哮喘发生有关，是广西黑衣壮儿童儿童哮喘哮喘发病的易感基因;3. RORA rs11071559C> T多态性与易感性升高与黑衣壮儿童哮喘有关；4. ORMDL3基因SNPs rs12603332和rs4065275位点与广西黑衣壮儿