乌头汤的抗风湿病情改善作用及配伍机制

抗风湿病情改善药（DMARDs）是指能够改善类风湿性关节炎（RA）疾病进程或阻止关节破坏，从而达到最终治疗目的的药物。寻求高效低毒的DMARDs是目前国际RA研究领域的热点和难点。本课题所选研究对象为来自《金匮要略》寒湿痹的著名经方乌头汤，该方临床治疗RA效果确切，但其病情改善作用及"增效减毒"的机理至今尚不清楚。研究将采用能体现RA临床特征和病理进程的胶原诱导性关节炎大鼠模型和RA滑膜成纤维细胞、巨噬细胞以及RA-HFLSA侵袭软骨的动态生物学模型，从免疫异常、关节滑膜炎症、软骨和骨破坏三个关键病理环节入手，通过体内与体外、系统与局部、形态与功能相结合的方法，对乌头汤﹑拆方及组分的病情改善作用及相关靶标进行系统研究，并探索毒效关系，以期阐述乌头汤配伍"增效减毒"的科学内涵。预期研究结果将为乌头汤的临床科学应用提供支持，也为同类中医方药的研究提供思路方法和技术平台。

本项目通过调整和补充研究，达到了预期目标。所取得的成果如下： .1.证明乌头汤具有抗风湿病情改善作用，同时也兼具抗风湿症状改善作用，且未见不良反应：乌头汤既能降低CIA和/或AA大鼠关节炎疾病严重度、抑制关节与骨组织病理学和影像学改变，又能降低RA疼痛小鼠的机械痛敏、冷痛敏和热痛敏，从而兼具抗风湿病情改善作用和抗风湿症状改善作用，其发挥抗RA作用的同时无耐受性，且不影响体重、脏器指数和肝肾功能，提示了乌头汤的安全有效性。.2.发现乌头汤对RA寒证疗效最好，对证（寒痹）治疗能最大程度发挥抗RA作用：在CIA和AA疾病模型的基础上建立RA寒证和热证大鼠病证结合模型，并借助这些模型证明了乌头汤能有效降低RA寒证大鼠关节皮肤表面温度和痛敏，抑制关节皮肤血流速度和改善血液流变，降低关节炎疾病严重度、组织病理和影像学改变程度，但对RA热证效果不明显。进一步的研究证明了乌头汤对RA寒证发挥显著疗效可能与其调控PPAR-γ共激活因子在产热通路中的作用有关。.3.阐述了乌头汤抗RA作用的分子机制：乌头汤既能有效抑制CIA和/或AA大鼠关节局部以及体外培养的RA-HFLS细胞中促炎细胞因子、促血管生成因子和关键基质金属蛋白酶的表达水平，也能显著降低RA小鼠和/或大鼠炎症关节皮肤及背根神经节中的TRPV1和TRPA1活性和蛋白表达，这可能是其发挥抗风湿病情改善和症状改善作用的主要机制。.4.分析了乌头汤及其组方抗RA作用的物质基础和体内过程：共鉴定出了乌头汤中的160多种化合物，主要化学生物标志物为单酯型和醇胺型生物碱；7种生物碱为乌头汤的吸收转运成分，乌头、麻黄类生物碱、黄酮类、黄酮苷类、单萜糖苷类和三萜皂苷类成分则是其代谢成分；同步鉴定了乌头汤所含各药味的主要活性成分以及在乌头汤复方中的存在情况。进一步的代谢组学研究结果显示，乌头汤能有效改善AA大鼠尿液中色氨酸、苯丙氨酸的代谢通路，其生物标志物包括犬尿喹啉酸、4,8-二羟基喹啉、柠檬酸、缬氨酸、苯丙氨酸、胆酸、皮质醇等。.5.基于肝肠生物利用度屏障探讨了乌头汤增效减毒的组方原理：以睾酮为探针，采用肝微粒体温孵法研究了乌头汤和组方内各药物对大鼠肝药酶CYP3A的影响，发现生/制川乌单药对CYP3A代谢活性、蛋白和基因表达均具有很强的抑制作用，而乌头汤则能明显缓解君药川乌的这一抑制作用，这从药物相互作用角度说明了乌头汤组方的合理性。