广西壮族儿童原发性肾病综合征相关基因的筛选及蛋白质谱差异表达的研究

In order to investigate the role of relative gene of primary nephritic syndrome (PNS) in development, pathologic change and effect of hormone in Zhuang nationality children, molecular technology was carried out to detect gene expression spectrum of PBMC from children suffered with PNS. The differential expression of gene spectrum between healthy Zhuang nationality children and who with PNS, Zhuang nationality children and Han nationality children suffered with PNS both were detected respectively. Meanwhile, SELDI-TOF-MS was used to detect protein spectrum in serum from PNS children and further screen PNS child-specific protein markers in serum，which may be used for diagnosis, prognosis and selection of individual therapeutic regimen of PNS in children. Additionally, discovery of specific gene markers presented in various pathological conditions will profit us to establish nephrosis relative gene bank in Guangxi Zhuang nationality children and draw a gene expression network about nephrosis. This study will provide an important resource for exploitation of diagnositic chip for PNS, as well as theoretical evidence for searching a specific treatment aiming at key genes in development of PNS.

利用分子生物学技术检测外周血单个核细胞（PBMC）基因表达谱的变化，观察广西壮族儿童PNS与正常壮族儿童及汉族PNS儿童基因表达谱的差异，探讨壮族儿童PNS相关基因在PNS发生、发展、病理改变及对激素效应中的作用；同时，采用 SELDI-TOF-MS从蛋白质组学水平研究PNS血清蛋白质表达谱及变化规律，筛选可用于PNS患儿诊断、判断预后、个体化治疗的选择等血清蛋白质特异性标志物。为建立广西壮族儿童肾脏相关基因表达数据库、绘制肾脏相关基因作用通路或网图进一步寻找各种病理条件下的基因标志，为本领域继续研究和开发诊断芯片提供重要资源，并为探讨在PNS发生发展中起关键作用的基因予以特异性治疗提供理论依据。

PNS的病因和发病机制尚未阐明，其发生、发展，转归存在民族与地区差异，遗传因素对PNS发生发展起到重要的作用，基因的突变、缺失、多态性及表达的差异则是导致此现象发生的根源。全面地认识这些基因，对于揭示PNS发病机制及治疗具有重要意义。本项目采用分子生物学技术检测 PNS 基因型，对广西壮族儿童 PNS 患儿ACTN4、TRPC6、PLCE1 和CD2AP基因进行研究，并与正常壮、汉儿童比较，探讨壮、汉两民族 PNS 患儿基因表达谱的差异。结果：（1）经过数据分析及生物信息学分析，发现5种只在病例组中出现的ACTN4基因致病杂合突变(7例)，发现3种病例组（6例）及健康组（7例）均出现的ACTN4基因潜在致病杂合突变，健康组ACTN4血清水平明显高于PNS组。（2）TRPC6基因致病突变 发现2号外显子上的c.172C>T（p.R58W）杂合突变，可导致相关蛋白表达和功能异常，考虑为壮族儿童PNS致病基因突变。（3）发现6种杂合CD2AP基因突变，健康组未检测到致病突变，另有2种新的致病突变，健康组CD2AP 血清水平为明显高于PNS组。（4）PLCE1基因致病突变测序结果显示，病例组中发现了7例7种低频突变。 科学意义：（1）国内外均有报道PNS ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP基因突变表现为人类常染色体显性遗传的FSGS，本研究在壮族儿童其他病理类型PNS也有发现ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP基因致病突变。（2）在健康组检测出ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP基因致病突变考虑为潜在致病突变，尚未发病。（3）健康组血清ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP蛋白水平均明显高于肾病综合征组，血清中 ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP蛋白水平可能为壮族儿童PNS保护性蛋白。（4）在PNS组中检测到几种ACTN4、TRPC6、PLCE1 、CD2AP基因突变经检索在db SNP、1000Genomes、ESP6500、Ex AC03、Ex AC03_EAS、gnom AD、Hrcr1、Kaviar_20150923、GENESKYDB_Freq数据库均未检索出这几种基因杂合突变，为壮族儿童PNS患儿基因新发现的突变。