差异蛋白质组学技术筛选哈萨克族食管癌的新型分子标志物研究

The death and occurrence date of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is more and more in Kazak nationality in Xinjiang. The death rate of EC of Kazakh nationality is 89.92/100000. It is higher then other nationalities in Xinjiang. The cancer seriouly affects the natinonality health. At the subject,It is used by laser capture microdissection (LCM) for esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) cells and human normal epithelial cells (NEEC), then proteins are collected by two dimensional gel electrophoresis (2-DE), and then analyzed using Imagemaster 2D software. Differential proteins between ESCC and NEEC cells are identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) and ESI-Q-TOF-MS. Western blot and immunohistochemistry identify the proteins. Comebining with clinical and pathology information, it is known that there are relationships between the proteins and the prognosis and they are maybe the molecular markers of prognostic and early diagnosis of ESCC. It is a foundation of early diagnosis,deciding prognosis and the single treatment of ESCC.

新疆哈萨克族食管癌发病率和死亡率呈逐年上升趋势，死亡率达到89.92/10万，高于其他民族，严重威胁地区居民的健康。本项目在前期工作基础上拟进一步利用激光显微切割(LCM)技术分别对哈萨克族病例食管癌和癌旁食管正常粘膜上皮组织进行微切割，获取食管癌细胞和食管正常粘膜上皮细胞，应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离、纯化细胞的蛋白质，并进行图像分析识别差异表达蛋白的位点,再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western印迹和免疫组织化学技术验证差异蛋白。结合临床病理和随访资料，筛选出食管癌相关的新型分子标志物，为新疆哈萨克族食管癌的早期临床诊断、制定个体化治疗方案、判断预后奠定基础。

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤，在癌症死亡原因中居第5位。食管癌高发人群主要集中在中老年男性，就诊时常处于中晚期，迄今为止，尚无有效的治疗手段，5年生存率仅为5%～13%。课题成功筛选出本63个差异蛋白点，剔除重复的蛋白点20个，有意义的差异蛋白43个。其中在哈萨克族和汉族的食管鳞癌组织表达量均上调的点有25个，在哈萨克族、汉族的食管鳞癌组织均下调的蛋白点有14个，另有4个蛋白在哈萨克族、汉族的食管鳞癌组织中表达不一致。随后对其中部分蛋白质进行差异分析发现 western blot结果显示KRT1、KRT10、GSTP1、HSP27，SM22，TAGLN2、P38MAPK蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达高于相应癌旁正常组织（P＜0.05），在哈萨克族与汉族中表达无统计学差异（P>0.05），HSP27，SM22在食管鳞状细胞癌淋巴结转移组表达升高(P<0.05)。免疫组化结果结合临床病理参数分析，显示KRT1、KRT10的表达与食管鳞癌组织的分化程度有关（P<0.05），GSTP1在食管鳞状细胞癌中的强阳性表达与患者的年龄、性别、族别、淋巴结转移与否有关（P<0.05），HSP27，SM22，TAGLN2表达阳性与食管癌淋巴结转移存在相关性(P<0.05)；SM22，TAGLN2，P38MAPK表达阳性与食管癌浸润深度存在相关性(P<0.05)；KRT1、KRT10、GSTP1、HSP27，SM22，TAGLN2，P38MAPK是食管鳞状细胞癌发生发展过程中的重要变化分子，可能对食管鳞状细胞癌恶性程度判断有一定的指导意义。但随访尚未完成，部分蛋白质鉴定工作尚需进一步结合数据库进行深入的分析，相关的临床病理参数及相关蛋白质意义仍须结合分子生物学数据库进行比对.