红豆杉体细胞杂种紫杉醇合成基因的高效表达及其等位变异研究

红豆杉野生资源匮乏，紫杉醇合成的分子机制尚不完全清楚。利用体细胞杂交可将决定药效成分的基因在不同科、属、种间相互转移，再生出高含量药效成分的体细胞杂种。实验表明，太平洋红豆杉生长快，云南红豆杉紫杉醇含量较高，两种红豆杉的体细胞杂交获得了大量紫杉醇含量不同的杂种细胞系。本研究拟对获得的种间红豆杉体细胞杂种进行化学成分代谢谱鉴定、紫杉醇含量测定及快速繁殖条件的优化，筛选出生长快、紫杉醇含量高的杂种细胞系。建立起高和低紫杉醇含量的细胞系库（"突变体池"），通过染色体分析、已知基因为引物的PCR、RT-PCR和Northern 杂交，比较不同紫杉醇含量的细胞系遗传组成，紫杉醇合成基因的等位变异及其表达差异模式及其与紫杉醇含量的关系，获得紫杉醇合成关键酶基因及其调控紫杉醇合成的相关新基因片段，为进一步克隆目标基因及实现利用体细胞杂种液体培养大规模生产紫杉醇奠定基础。